本文關(guān)鍵詞：NF-κB、ELAM-1在小梁網(wǎng)細(xì)胞氧化損傷中的表達(dá)及干預(yù)研究

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【摘要】：目的：本實(shí)驗(yàn)利用α-硫辛酸(α-LA)干預(yù)氧化應(yīng)激下的大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞,觀察小梁網(wǎng)細(xì)胞的形態(tài)變化,檢測(cè)核轉(zhuǎn)錄因子-κB (NF-κB)、內(nèi)皮細(xì)胞白細(xì)胞黏附分子-1(ELAM-1)的表達(dá),探討氧化應(yīng)激、NF-κB、ELAM-1在原發(fā)性開(kāi)角型青光眼(POAG)發(fā)病機(jī)制中的作用,以及α-LA對(duì)小梁網(wǎng)細(xì)胞的保護(hù)機(jī)制。 方法：原代培養(yǎng)大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞,免疫組化法鑒定。取傳至第三代的細(xì)胞按2×10S/ml消化傳入6孔板,血清饑餓過(guò)夜。隨機(jī)分為五組：A組為正常對(duì)照組,加入不含藥物的無(wú)血清培養(yǎng)基；B組為單純H2O2損傷組,加入等量含800μM H2O2的無(wú)血清培養(yǎng)基；C組為α-LA干預(yù)組,按照給予α-LA濃度的不同分為C1、C2、C3三個(gè)亞組,加入等量含800μM H2O2以及濃度依次為100μM、500μM、1000μM的α-LA的無(wú)血清培養(yǎng)基。將各組細(xì)胞均置于5%CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)2h。光學(xué)顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化,免疫組化法和Real-time PCR法檢測(cè)并比較各組NF-κB、ELAM-1表達(dá)的變化。 結(jié)果： 1.利用消化法成功培養(yǎng)出大鼠小梁網(wǎng)細(xì)胞,原代細(xì)胞呈三角形、梭形或不規(guī)則形,10～14天融合成旋渦狀單層細(xì)胞,傳至第三代后細(xì)胞形態(tài)穩(wěn)定,梭形,胞漿豐富,顆粒多,可見(jiàn)較多突起及分支。取傳至第三代的細(xì)胞行Anti-LN、Anti-FN、Anti-NSE免疫組化染色鑒定,見(jiàn)細(xì)胞質(zhì)呈棕黃色陽(yáng)性顆粒,陰性對(duì)照不著色,符合小梁網(wǎng)細(xì)胞的特性。 2.與A組相比,B組小梁網(wǎng)細(xì)胞突起減少,細(xì)胞回縮,間隙擴(kuò)大,細(xì)胞數(shù)量減少；而C組隨著α-LA濃度的增加,細(xì)胞形態(tài)改變與A組相比逐漸趨于不明顯。 3.五組小梁網(wǎng)細(xì)胞NF-κB表達(dá)有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=426.515,P=0.000)。A組小梁網(wǎng)細(xì)胞質(zhì)中少量表達(dá)NF-κB;B組NF-κB大量活化進(jìn)入細(xì)胞核,表達(dá)量較A組明顯升高(p=0.000)；C組中NF-κB在胞質(zhì)、胞核中均有表達(dá),且與B組相比,NF-κB mRNA表達(dá)量降低(p分別為0.036、0.000、0.000)；C2、C3兩組與C1組相比明顯降低(p=0.000)；C2、C3兩組間比較無(wú)明顯差異(p=0.204)；C2組與A組相比仍偏高(p=0.016),但C3組與A組相比無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.155)。 4.五組小梁網(wǎng)細(xì)胞ELAM-1均表達(dá)在細(xì)胞質(zhì),且表達(dá)量有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=96.409,P=0.000)。A組少量表達(dá)ELAM-1mRNA; B組較A組表達(dá)明顯升高(p=0.000)；C組較B組表達(dá)均明顯降低(p分別為0.016、0.000、0.000)；隨著a-LA濃度的增加,C1、C2、C3三組ELAM-1mRNA的表達(dá)量逐漸下降,兩兩比較均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p均為0.000)；C3組與正常組相比仍然偏高(p=0.004)； 結(jié)論： 1.氧化應(yīng)激產(chǎn)生的氧自由基可通過(guò)活化NF-κB,進(jìn)一步激活ELAM-1的轉(zhuǎn)錄,導(dǎo)致小梁網(wǎng)細(xì)胞形態(tài)改變、細(xì)胞丟失； 2. ELAM-1可能通過(guò)包括NF-κB在內(nèi)的多種途徑激活,影響小梁網(wǎng)細(xì)胞的形態(tài)和功能； 3.α-LA可通過(guò)抑制NF-κB的活化,進(jìn)一步減少ELAM-1的表達(dá),減輕氧化應(yīng)激對(duì)小梁網(wǎng)細(xì)胞的損害； 4.α-LA對(duì)NF-κB以及ELAM-1表達(dá)的抑制與α-LA呈濃度依賴性,1000μM的α-LA可阻斷由800μM H2O2誘導(dǎo)的小梁網(wǎng)細(xì)胞中NF-κB的激活,但不能完全阻斷ELAM-1表達(dá)的上調(diào)。
【關(guān)鍵詞】：小梁網(wǎng)細(xì)胞 氧化應(yīng)激 NF-κB ELAM-1 α-硫辛酸
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R775.2
【目錄】：

• 摘要2-4
• Abstract4-7
• 引言7-9
• 第一部分 小梁網(wǎng)細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定9-17
• 材料和方法9-11
• 結(jié)果11-13
• 討論13-14
• 參考文獻(xiàn)14-17
• 第二部分 NF-κB、ELAM-1在小梁網(wǎng)細(xì)胞氧化損傷中的表達(dá)及α-LA對(duì)小梁網(wǎng)細(xì)胞的保護(hù)作用17-34
• 材料和方法17-21
• 結(jié)果21-27
• 討論27-31
• 參考文獻(xiàn)31-34
• 全文結(jié)論34-35
• 綜述35-44
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果44-45
• 致謝45-46

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1028974