本文關(guān)鍵詞：卵泡抑素樣蛋白1抵抗過(guò)量一氧化氮誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： FSTL1 SNP Akt信號(hào)通路 Smad1/5/8信號(hào)通路

【摘要】：目的:已證實(shí)心功能不全與心肌細(xì)胞的凋亡密不可分,心肌細(xì)胞的凋亡又與過(guò)量一氧化氮(NO)蓄積有著很大的關(guān)系,硝普鈉(SNP)作為臨床上廣泛運(yùn)用的血管擴(kuò)張劑,同時(shí)它也是廣泛運(yùn)用的NO供體,對(duì)心肌細(xì)胞有損傷作用。因此本實(shí)驗(yàn)旨在研究卵泡抑素樣蛋白1(FSTL1)對(duì)SNP誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。方法:選用大鼠成肌細(xì)胞系(H9C2)細(xì)胞培養(yǎng)傳代進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)。(1)通過(guò)SNP(2mM)刺激H9C2細(xì)胞24h建立SNP誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞凋亡模型;(2)通過(guò)q-PCR和Western Blot檢測(cè)SNP刺激H9C2前后FSTL1的表達(dá)是否有差異;(3)通過(guò)引入外源性的FSTL1(100ng/ml)預(yù)處理H9C2細(xì)胞30min比較SNP刺激后H9C2細(xì)胞凋亡是否減少;(4)通過(guò)轉(zhuǎn)染siFSTL1比較SNP刺激后H9C2細(xì)胞凋亡是否增加;(5)用總一氧化氮檢測(cè)試劑盒采用硝酸酶還原法將硝酸鹽還原為亞硝酸鹽,然后通過(guò)檢測(cè)亞硝酸鹽的含量,間接計(jì)算出總一氧化氮;(6)通過(guò)引入PI3K/Akt、Smad2/3抑制劑LY294002和SB5253334和Smad1/5/8信號(hào)通路激動(dòng)劑BMP-4研究FSTL1保護(hù)H9C2的分子機(jī)制。結(jié)果:利用DAPI染色結(jié)果可以顯示H9C2細(xì)胞在SNP(2mM)刺激24h后與沒(méi)有經(jīng)過(guò)SNP刺激的H9C2細(xì)胞比較,H9C2細(xì)胞的凋亡數(shù)量顯著增加。以FSTL1(100ng/ml)預(yù)處理30min再以SNP刺激后H9C2細(xì)胞的凋亡顯著降低。通過(guò)轉(zhuǎn)染沉默掉內(nèi)源性的FSTL1后再以SNP刺激H9C2細(xì)胞,其凋亡數(shù)量比未沉默內(nèi)源性的FSTL1的凋亡數(shù)量顯著增加。q-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示SNP刺激H9C2后其表達(dá)的FSTL1在基因水平減少,Western Blot檢測(cè)結(jié)果顯示SNP刺激H9C2后其表達(dá)的FSTL1在蛋白水平減少�？傄谎趸獧z測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果顯示在SNP刺激后培養(yǎng)基中NO的含量比對(duì)照組明顯增加,但是以FSTL1預(yù)處理30min后再以SNP刺激NO的含量比沒(méi)有FSTL1預(yù)處理組顯著降低。通過(guò)引入PI3K/Akt信號(hào)通路抑制劑LY294002干擾Akt信號(hào)通路后發(fā)現(xiàn)FSTL1保護(hù)H9C2細(xì)胞的作用明顯減弱,引入BMP4激動(dòng)Smad1/5/8信號(hào)通路發(fā)現(xiàn)FSTL1保護(hù)H9C2細(xì)作用明顯減弱,而引入SB523334抑制Smad2/3信號(hào)通路后FSTL1保護(hù)H9C2細(xì)胞的作用前后無(wú)明顯變化。結(jié)論:FSTL1對(duì)SNP誘導(dǎo)的H9C2心肌細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用;FSTL1保護(hù)心肌細(xì)胞凋亡的作用至少是通過(guò)激活A(yù)kt信號(hào)通路和抑制Smad1/5/8信號(hào)通路實(shí)現(xiàn)的。
【關(guān)鍵詞】：FSTL1 SNP Akt信號(hào)通路 Smad1/5/8信號(hào)通路
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R54
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-20
• 一、材料11-12
• 二、實(shí)驗(yàn)方法12-20
• 結(jié)果20-32
• 一、H9C2心肌細(xì)胞的培養(yǎng)及鏡下的形態(tài)觀察20
• 二、SNP誘導(dǎo)的H9C2凋亡模型的建立20-21
• 三、SNP刺激后FSTL1的表達(dá)變化21-23
• 四、FSTL1對(duì)SNP誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用23-24
• 五、沉默內(nèi)源性FSTL1后SNP誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞凋亡數(shù)量增加24-26
• 六、NO濃度檢測(cè)26-27
• 七、LY294002抑制PI3K/AKT信號(hào)通路抑制FSTL1保護(hù)心肌細(xì)胞27-28
• 八、BMP-4 激動(dòng)SMAD1/5/8 信號(hào)通路抑制FSTL1保護(hù)心肌細(xì)胞28-30
• 九、SB525334抑制SMAD2/3 信號(hào)通路FSTL1保護(hù)作用無(wú)明顯變化30-32
• 討論32-37
• 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-42
• 綜述42-50
• 參考文獻(xiàn)47-50
• 中英文縮略詞對(duì)照50-51
• 攻讀碩士期間公開(kāi)發(fā)表的論文51-52
• 致謝52-54

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