本文關(guān)鍵詞：應(yīng)用微陣列芯片分析糖尿病大鼠下肢動脈硬化microRNAs差異表達譜

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【摘要】：臨床中我們發(fā)現(xiàn),越來越多的糖尿病病人患上了下肢動脈硬化,臨床表現(xiàn)特點有間歇性跛行、靜息痛、缺血性壞疽。迄今動脈硬化具體詳細(xì)的發(fā)病機制還未闡明,目前較為普遍認(rèn)同“損傷應(yīng)激學(xué)說”對其發(fā)病機制的表述,但是卻未涉及基因調(diào)控。由于發(fā)病機制在基因調(diào)控領(lǐng)域中的空白,不能確定相關(guān)基因的干預(yù)靶點,影響到了對糖尿病下肢動脈硬化的有效預(yù)防和治療。最近十年microRNAs成為基因研究領(lǐng)域中最熱門的一環(huán),預(yù)計約30%的人類基因都會受microRNAs調(diào)控,一個microRNA家族可能與多達200個靶基因結(jié)合,相比大量的靶基因,起調(diào)控作用的microRNAs數(shù)量要少的多,所以使得我們通過microRNAs研究糖尿病下肢動脈硬化的發(fā)病機制更容易進行,同時這也是運用microRNAs研究基因表達調(diào)控的巨大優(yōu)勢。所以本項研究首先通過建立大鼠模型,探究microRNAs在糖尿病下肢動脈硬化中的表達情況,為后續(xù)探究人類患有糖尿病與下肢動脈硬化的發(fā)病機制打下動物模型理論實驗基礎(chǔ)。目的：建立大鼠模型,檢測糖尿病大鼠下肢動脈硬化(糖硬)與糖尿病大鼠下肢非動脈硬化(糖非)的下肢動脈組織中microRNAs的差異表達情況,探究異常表達的microRNAs參與糖尿病大鼠下肢動脈粥樣硬化的可能的分子機制。方法：選取動物建模成功的患有糖尿病下肢動脈硬化和患有糖尿病非下肢動脈硬化的大鼠,取出下肢動脈血管組織,分別提取總的microRNAs,用microRNAs微陣列芯片中進行雜交檢測,經(jīng)過芯片掃描和數(shù)據(jù)分析,然后通過RT-qPCR驗證芯片的掃描分析結(jié)果,最終獲得糖尿病大鼠下肢動脈硬化的microRNAs差異表達譜。結(jié)果：篩選出10個與糖尿病大鼠患有下肢動脈硬化有關(guān)的microRNAs,即rno-miR-206-3p、rno-miR-133a-5p、rno-miR-133b-3p、rno-miR-133a-3p、 rno-miR-325-5p、rno-miR-675-3p、rno-miR-411-5p、rno-miR-329-3p、rno-miR-335、 rno-miR-126a-3p,10個異常表達的microRNA都上調(diào)。RT-qPCR證實,其中9個microRNA與芯片檢查結(jié)果一致,僅僅rno-miR-335的PCR檢測結(jié)果與基因芯片檢測結(jié)果相反,為表達下調(diào)。芯片顯示糖尿病下肢動脈硬化上調(diào)明顯的rno-miR-206-3p、rno-miR-133a-5p、rno-miR-675-3p,分別達到了99倍,39倍,18倍,且P0.05,實時定量也顯示相似的表達倍數(shù)。依據(jù)數(shù)據(jù),值得關(guān)注這三種microRNAs,作為后續(xù)有關(guān)功能實驗的關(guān)鍵microRNAs結(jié)論：有一群microRNAs在糖尿病大鼠下肢動脈硬化中扮演著重要作用,其表達過程很可能影響著血管動脈硬化的進程。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病 下肢動脈硬化 microRNAs 微陣列
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R587.2;R543.5
【目錄】：

• 摘要6-8
• Abstract8-12
• 縮略詞表12-13
• 第一章 緒言13-28
• 1.1 糖尿病以及并發(fā)癥13-15
• 1.2 糖尿病血管病變相關(guān)分子機制15-17
• 1.3 MicroRNAs的發(fā)現(xiàn)與發(fā)展17-18
• 1.4 MicroRNAs在生物中的發(fā)生和表達18-19
• 1.5 MicroRNAs的特點和研究領(lǐng)域19-23
• 1.6 MicroRNAs與糖尿病23-24
• 1.7 MicroRNAs與動脈硬化24-25
• 1.8 聯(lián)想推測microRNAs可能參與糖尿病下肢動脈硬化的發(fā)生發(fā)展25
• 1.9 基因表達分析解決方案25-28
• 第二章 實驗分析28-80
• 2.1 前言28
• 2.2 材料和方法28-41
• 2.2.1 材料28-31
• 2.2.2 方法31-41
• 2.3 統(tǒng)計學(xué)方法41
• 2.4 結(jié)果41-80
• 2.4.1 糖尿病大鼠下肢動脈硬化建模及診斷結(jié)果41-46
• 2.4.2 樣本total RNA提取質(zhì)檢結(jié)果46-47
• 2.4.3 MicroRNAs數(shù)據(jù)質(zhì)量評估47-53
• 2.4.4 片樣品雜交信號相關(guān)性53-55
• 2.4.5 MicroRNAs芯片雜交信號原始掃描結(jié)果55-56
• 2.4.6 MicroRNAs芯片篩查結(jié)果56-63
• 2.4.7 差異表達microRNAs聚類分析63-64
• 2.4.8 篩選的差異表達microRNAs實時熒光定量PCR驗證結(jié)果64-67
• 2.4.9 MicroRNAs芯片結(jié)果與實時定量PCR結(jié)果比較67-69
• 2.4.10 MicroRNAs與mRNA靶向關(guān)系分析69-80
• 第三章 討論和結(jié)論80-86
• 3.1 討論80-84
• 3.2 結(jié)論84-86
• 致謝86-87
• 參考文獻87-92
• 附錄A 攻讀碩士期間發(fā)表論文目錄92-93
• 附錄B 其他需要說明內(nèi)容93

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本文編號：929053