本文關(guān)鍵詞：miR-34a-5p經(jīng)c-Myc及STAG-2通路參與β射線對臍血管內(nèi)皮細胞損傷修復(fù)

  更多相關(guān)文章： 放射性核素 氚水 DNA損傷副作用 miR-34a-5p c-Myc STAG-2

【摘要】：背景:血管穩(wěn)態(tài)對人體健康至關(guān)重要,血管內(nèi)皮損傷導(dǎo)致血管穩(wěn)態(tài)破壞,將會導(dǎo)致包括冠心病在內(nèi)的多種疾病的發(fā)生。放射性核素可以產(chǎn)生β射線,廣泛用于腫瘤疾病的治療,但其伴隨的副作用不容忽視。我們推測:β射線的副作用與其損傷血管內(nèi)皮,破壞了血管穩(wěn)態(tài)有關(guān),具體機制,國內(nèi)外尚未見報道。因此,建立氚水(HTO)內(nèi)照射模型來探討放射性核素所產(chǎn)生的β射線對血管內(nèi)皮細胞的損傷及修復(fù)機制。方法:將HTO加入臍血管內(nèi)皮細胞(HUVEC)培養(yǎng)基中,連續(xù)培養(yǎng)三天,期間每天用CCK8比色測定法及臺盼藍細胞計數(shù)法來測定HTO組以及對照組細胞的增殖能力以及細胞活力。12小時內(nèi)分別抽取6個不同的時間點,用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測HTO組HUVEC細胞中mi R-34a-5p表達水平。在四個不同的時間點,分別對對照組和HTO組的細胞使用彗星分析法和γ-H2AX免疫熒光染色法來測量DNA單鏈斷裂和DNA雙鏈斷裂情況。通過脂質(zhì)體2000將mi R-34a-5p類似物(mi R-34a-5p mimics),mi R-34a-5p抑制物(mi R-34a-5p inhibitor)以及它們的對照組分別轉(zhuǎn)染進入HUVEC細胞中。將這四組細胞都暴露于HTO環(huán)境下,連續(xù)培養(yǎng)三天,用同樣的方法來測定每天各組細胞的增殖能力以及細胞活力。用同樣的方法測定四個時間點(0h,0.5h,2h,4h)上各組細胞的DNA單鏈斷裂和DNA雙鏈斷裂的情況。最后,我們用RNA提取和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)的實驗方法來測定上述六組HUVEC細胞中c-Myc以及STAG-2基因在0.5h,2h的表達情況。結(jié)果:與對照組相比,HTO組HUVEC細胞增殖能力及細胞活力在連續(xù)3天測定中均明顯低于對照組。HTO組細胞中mi R-34a-5p的表達發(fā)生明顯動態(tài)變化,根據(jù)mi R-34a-5p表達的動態(tài)變化,我們選擇mi R-34a-5p表達最高點、最低點以及急性期的兩個時間點來進行研究,分別是0h,0.5h,2h以及4h。除了0h以外,其余三個時間點,HTO組HUVEC細胞DNA單鏈以及雙鏈的損傷相對于對照均明顯增高,且趨勢一致。同樣的,在0.5h、2h、4h三個時間點上,mi R-34a-5p mimics組HUVEC細胞DNA單鏈以及雙鏈的損傷均高于mi R-34a-5p inhibitor組,相反其細胞增殖能力以及細胞活力均明顯低于mi R-34a-5p inhibitor組。我們觀察到mi R-34a-5p mimics組中c-Myc以及STAG-2基因的表達在0.5h、2h均低于mi R-34a-5p inhibitor組。結(jié)論:mi R-34a-5p能夠調(diào)節(jié)基因c-Myc以及STAG-2的表達來參與HTO引起HUVEC細胞損傷及修復(fù)過程。本研究從分子水平證實了β射線對血管內(nèi)皮細胞的損傷機制,并為防治放射性核素臨床毒副作用提供了嶄新的視角。
【關(guān)鍵詞】：放射性核素 氚水 DNA損傷副作用 miR-34a-5p c-Myc STAG-2
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R54
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 引言9-11
• 第一部分 氚水產(chǎn)生的β射線抑制血管內(nèi)皮細胞增殖、導(dǎo)致血管內(nèi)皮細胞DNA損傷并引起miR-34a-5p在血管內(nèi)皮細胞中的表達發(fā)生動態(tài)變化11-22
• 1.1 實驗材料11-13
• 1.2 實驗方法13-17
• 1.3 實驗結(jié)果17-21
• 1.4 討論21-22
• 第二部分miR-34a-5p調(diào)節(jié)下游c-Myc及STAG-2基因的表達參與β射線引起HUVEC細胞的損傷修復(fù)過程22-38
• 2.1 實驗材料22-24
• 2.2 實驗方法24-30
• 2.3 實驗結(jié)果30-36
• 2.4 討論36-38
• 結(jié)論38-39
• 參考文獻39-45
• 綜述45-53
• 參考文獻50-53
• 中英文對照縮略語詞表53-55
• 攻讀碩士學(xué)位期間公開發(fā)表的論文55-56
• 致謝56-57

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本文編號：926203