本文關鍵詞：低剪切應力對血管內皮細胞自噬的影響及其機制的初步研究

  更多相關文章： 低剪切應力 血管內皮細胞 自噬 TET2 動脈粥樣硬化

【摘要】：[目的]觀察低剪切應力對人臍靜脈內皮細胞(HUVECs)自噬的影響并探討其機制。[方法](1)apo E-/-小鼠喂飼高脂飲食,分別于0、4、8和12周處死,取主動脈竇部做冰凍切片,主動脈提蛋白。HE和油紅O染色法觀察動脈粥樣硬化(Atherosclerosis,As)斑塊病變;免疫組織化學法和Western blot檢測BECLIN 1、LC3和P62以及TET2的蛋白表達;免疫熒光法觀察5-m C和5-hm C的含量。(2)將HUVECs置于體外灌流系統(tǒng),分別以低剪切應力(5 dyne/cm2)和正常剪切應力(15 dyne/cm2)處理1h,Western blot檢測BECLIN 1、LC3和P62以及TET2的蛋白表達。再以巴伐洛霉素孵育2h,觀察LC3II/LC3I的比值。(3)低表達和高表達TET2質粒轉染HUVECs,Western blot檢測BECLIN 1、LC3和P62的蛋白表達。再以不同剪切應力處理1h,Western blot檢測BECLIN 1、LC3、P62和ET-1及e NOS的蛋白表達。[結果]隨著高脂飲食時間的延長,As病變程度逐漸加重。As病變進程中BECLIN 1、LC3和P62的蛋白含量顯著增加;TET2的蛋白表達明顯降低;5-m C的含量顯著增加,且其增加幅度顯著高于5-hm C。與正常剪切應力組相比,低剪切應力組BECLIN 1和LC3II/LC3I的蛋白表達降低;自噬障礙標志物P62的蛋白表達增加;TET2的蛋白表達降低。巴伐洛霉素孵育2h后,低剪切應力組LC3II/LC3I無明顯變化,而正常剪切應力組LC3II/LC3I明顯增大。不同剪切應力處理后,高表達TET2可以上調BECLIN 1、LC3II/LC3I及e NOS的蛋白表達,下調P62及ET-1的蛋白表達;而低表達TET2可以下調BECLIN1、LC3II/LC3I及e NOS的蛋白表達,上調P62及ET-1的蛋白表達。[結論]低剪切應力下調血管內皮細胞TET2的蛋白表達從而抑制血管內皮細胞自噬。
【關鍵詞】：低剪切應力 血管內皮細胞 自噬 TET2 動脈粥樣硬化
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R54
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 主要縮略詞英文索引11-12
• 第1章 緒論12-20
• 1.1 選題背景及意義12-13
• 1.2 國內外研究現(xiàn)狀13-16
• 1.3 研究目標、內容及擬解決的關鍵技術問題16-20
• 1.3.1 研究目標16
• 1.3.2 研究內容16
• 1.3.3 研究方法和可行性分析16-17
• 1.3.4 擬解決的關鍵問題和創(chuàng)新點17-20
• 1.3.4.1 擬解決的關鍵問題17
• 1.3.4.2 創(chuàng)新點17-20
• 第2章 實驗材料與研究方法20-28
• 2.1 實驗材料與儀器20-23
• 2.1.1 實驗所用動物、細胞和試劑20-21
• 2.1.2 主要儀器設備21-23
• 2.2 實驗方法23-28
• 2.2.1 動物飼養(yǎng)及心臟和主動脈的獲取23
• 2.2.2 細胞培養(yǎng)和灌流系統(tǒng)23-24
• 2.2.3 質粒轉染24
• 2.2.4 蛋白質免疫印跡24-26
• 2.2.4.1 蛋白質提取24-25
• 2.2.4.2 Western Blot25-26
• 2.2.5 HE染色26
• 2.2.6 油紅O染色26-27
• 2.2.7 免疫組織化學染色27
• 2.2.8 免疫熒光染色27
• 2.2.9 統(tǒng)計學方法27-28
• 第3章 實驗結果28-42
• 3.1 As病變進程中自噬相關基因的蛋白表達28-31
• 3.2 低剪切應力對血管內皮細胞自噬和自噬流的影響31-33
• 3.3 As病變進程中TET2的蛋白表達33
• 3.4 As病變進程中 5-mC和 5-hmC含量的改變33-34
• 3.5 低剪切應力對血管內皮細胞TET2蛋白表達的影響34-35
• 3.6 TET2干預對血管內皮細胞自噬的影響35-37
• 3.7 TET2干預對低剪切應力條件下血管內皮細胞自噬的影響37-39
• 3.8 TET2干預對低剪切應力條件下血管內皮細胞ET-1 蛋白表達的影響39-40
• 3.9 TET2干預對低剪切應力條件下血管內皮細胞eNOS蛋白表達的影響40-42
• 第4章 討論42-46
• 第5章 結論與展望46-48
• 5.1 結論46
• 5.2 不足與展望46-48
• 參考文獻48-52
• 文獻綜述52-74
• References67-74
• 作者攻讀碩士學位期間的科研成果74-76
• 致謝76-78
• 基金資助78

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李小紅;郭鳳霞;楊沁;李榮慶;趙戰(zhàn)芝;危當恒;;自噬干預對低剪切應力下血管內皮細胞eNOS和ET-1表達的影響[J];中國動脈硬化雜志;2014年09期

，

本文編號：791249