本文關(guān)鍵詞：Corin在動脈粥樣硬化中的表達(dá)及其作用的初步探討

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【摘要】：研究背景動脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)是冠心病、心梗、中風(fēng)等眾多心腦血管疾病的主要病理基礎(chǔ),控制動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展是防治這些心腦血管疾病的根本性戰(zhàn)略性措施。盡管目前關(guān)于動脈粥樣硬化的發(fā)病機(jī)制有多種學(xué)說,且許多基因都與其病理過程有關(guān),但作為一個多危險因素綜合作用導(dǎo)致的疾病,其確切原因仍不十分清楚。因此進(jìn)一步探尋動脈粥樣硬化相關(guān)基因及其在疾病中的作用,將有助于我們采取更加全面綜合和有效的方案來預(yù)防、治療與控制疾病。Corin是一種新發(fā)現(xiàn)的Ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶,主要在心臟表達(dá),通過活化心房利鈉肽(心鈉肽,atrial natriuretic peptide, ANP),調(diào)節(jié)血壓和心臟功能。Corin基因變異和功能障礙能導(dǎo)致其活性降低,可能與一系列心血管疾病如高血壓、心肌肥厚及心力衰竭等的發(fā)病相關(guān)。新近的研究表明,心肌細(xì)胞膜表面已處于活化狀態(tài)的corin可通過ADAM10酶切介導(dǎo)其脫落進(jìn)入血液循環(huán)中,且脫落釋放的可溶性corin片段是保留其活性的,所以心臟表達(dá)的corin可能通過這種方式到達(dá)其它組織器官局部發(fā)揮作用。流行病學(xué)研究表明,人血漿中可溶性corin濃度與肥胖、中風(fēng)、心肌梗死疾病相關(guān),提示corin可能參與了這些疾病的病理過程。但corin與動脈粥樣硬化的關(guān)系,還未見報道。在本研究中,我們通過體內(nèi)體外實驗,首次對corin在主動脈中的表達(dá)及其與動脈粥樣硬化的相關(guān)性進(jìn)行探討,并對其作用及機(jī)制進(jìn)行了初步研究。通過此研究,我們希望明確conn基因與動脈粥樣硬化病理過程之間的關(guān)系,進(jìn)一步擴(kuò)展我們對corin生物活性及作用特點的認(rèn)識,以及我們對動脈粥樣硬化發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識,進(jìn)一步為動脈粥樣硬化相關(guān)疾病的防治提供新的藥物作用靶點和思路。實驗?zāi)康?.檢測corin是否在主動脈中表達(dá),并確定其細(xì)胞表達(dá)定位。2.明確corin與動脈粥樣硬化損傷的相關(guān)性。3.分別對主動脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的corin和循環(huán)中由心肌細(xì)胞脫落而來的可溶性corin在動脈粥樣硬化中的作用及機(jī)制進(jìn)行初步探討。實驗方法1.本研究采用RT-PCR、免疫組化和免疫熒光染色技術(shù),首先確定corin是否在主動脈中表達(dá)及其細(xì)胞定位。2.體內(nèi)動物模型建立與分組：體內(nèi)實驗通過給予ApoE-/-小鼠高脂飲食建立體內(nèi)動脈粥樣硬化模型,設(shè)為動脈粥樣硬化(AS)組,正常飲食C57BL/6小鼠為對照組(WT)。然后采用RT-qPCR、Western blotting、免疫組化等技術(shù)檢測小鼠主動脈組織和心肌組織中corin及其底物ANP在動脈粥樣硬化動物模型中的表達(dá)變化,從而明確corin與動脈粥樣硬化的相關(guān)性。3.體外模型建立與分組：體外培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞HUVECs)株,首先通過RT-PCR和免疫組化、免疫熒光確認(rèn)corin在]HUVECs中是否有表達(dá),為以HUVECs作為體外模型奠定基礎(chǔ)。然后通過不同劑量ox-LDL刺激HUVECs,建立體外動脈粥樣硬化內(nèi)皮細(xì)胞損傷模型,采用RT-qPCR和細(xì)胞免疫熒光技術(shù),檢測細(xì)胞中corin的表達(dá)水平變化。有助于進(jìn)一步明確corin與動脈粥樣硬化的相關(guān)性。4. siRNA轉(zhuǎn)染及細(xì)胞劃痕實驗：體外通過小干擾RNA分別沉默內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞表達(dá)的corin,從而體外分別模擬主動脈內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的corin缺失、以及由心臟脫落而來的可溶性corin的缺失,然后通過內(nèi)皮細(xì)胞劃痕實驗,分別觀察這兩部分corin的缺失對內(nèi)皮細(xì)胞遷移功能的影響。從而對這兩部分corin在動脈粥樣硬化中的作用及機(jī)制進(jìn)行初步探討。實驗結(jié)果1. Corin在主動脈局部有表達(dá),且主要表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞。2.通過體內(nèi)動物實驗發(fā)現(xiàn),在動脈粥樣硬化模型組中,主動脈局部表達(dá)的corin-ANP升高,提示主動脈局部的corin可能通過活化ANP,參與動脈粥樣硬化過程。而心臟中corin-ANP的表達(dá)與正常對照組相比,沒有顯著差異,但心臟表達(dá)的corin有多少能夠脫落進(jìn)入循環(huán)到達(dá)主動脈局部發(fā)揮作用,我們尚未可知,因此對于心肌細(xì)胞合成后脫落生成的可溶性corin在動脈粥樣硬化中的作用,我們又設(shè)計了進(jìn)一步的體外實驗來進(jìn)行驗證。3.體外細(xì)胞實驗中,首先證實了corin在培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá),ox-LDL刺激內(nèi)皮細(xì)胞后, 內(nèi)皮細(xì)胞中corin表達(dá)升高,并呈現(xiàn)明顯劑量依賴性。4.小干擾RNA沉默使內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的corin缺失后,能夠抑制內(nèi)皮細(xì)胞的遷移；而使心臟脫落而來的可溶性corin缺失后,也能夠抑制內(nèi)皮細(xì)胞的遷移。提示主動脈局部內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的corin以及循環(huán)中由心肌細(xì)胞合成后脫落生成的可溶性corin都可能通過影響內(nèi)皮細(xì)胞功能,進(jìn)而參與到動脈粥樣硬化病理過程中。實驗結(jié)論在本研究中,我們首次發(fā)現(xiàn)主動脈內(nèi)皮細(xì)胞有corin的表達(dá),并證實了corin-ANP通路與動脈粥樣硬化的相關(guān)性。此外,首次證實了內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)的corin以及由心肌細(xì)胞合成后脫落生成的可溶性corin都可能通過影響內(nèi)皮細(xì)胞功能,從而在動脈粥樣硬化中發(fā)揮潛在的保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：Corin 心鈉肽 心血管疾病 動脈粥樣硬化 內(nèi)皮細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R543.5
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號說明13-17
• 前言17-19
• 實驗材料19-25
• 實驗方法25-37
• 實驗結(jié)果37-46
• 討論46-50
• 結(jié)論50
• 創(chuàng)新點及局限性50-51
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 致謝54-55
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文55-56
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表56

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 周荃;Corin在動脈粥樣硬化中的表達(dá)及其作用的初步探討[D];山東大學(xué);2016年

2 祝勁松;蛋白酶Corin在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化過程中的作用及機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2013年

3 張s，

本文編號：722359