發(fā)布時間：2017-08-19 13:41

  本文關鍵詞：靜脈內皮源性活性氧族上調核因子HIF-1α誘導VEGF表達參與DVT形成的研究

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【摘要】：[目的]1.參照經典文獻,利用下腔靜脈狹窄法造模,用三種不同外直徑的注射器針頭作為控制下腔靜脈狹窄的工具,摸索在保證低死亡率時既能成栓穩(wěn)定,又更能模仿臨床環(huán)境的大鼠IVC殘余管腔橫截面積百分比范圍。2.在確定適合的殘余管腔橫截面積百分比之后利用相應注射器針頭作為狹窄工具繼續(xù)用下腔靜脈狹窄法造模,研究大鼠狹窄法DVT模型和GSH干預模型的建立,以及觀察它們病理切片的不同表現(xiàn)。3.在造模24小時后取下腔靜脈及內容物,通過TBA法和QPCR技術,檢測大鼠靜脈內皮細胞中MDA含量、HIF-1α和VEGF mRNA的表達情況,探討DVT形成時ROS、HIF-1α和VEGF三者的作用及相互關系。[材料與方法]第一部分：大鼠下腔靜脈狹窄法構建瘀滯型DVT動物模型實驗一、大鼠下腔靜脈狹窄法確定IVC殘余管腔橫截面積百分比1.實驗分組：大鼠45只,按隨機分組原則分A組(n=15)、B組(n=15)、C組(n=15),且每組均采用下腔靜脈狹窄法制備深靜脈血栓模型；A、B、C三組分別采用外直徑為0.7mm (22G)、0.9mm (20G)、1.2mm (18G)注射器針頭控制大鼠DVT造模后殘余管腔橫截面積百分比。2.DVT大鼠下腔靜脈組織取材：在造模后24h時將大鼠過量麻醉,開腹后將結扎線至髂總靜脈分叉處之間下腔靜脈及其內容物取下觀察是否有血栓形成。3.指標測定和統(tǒng)計學分析：統(tǒng)計每組大鼠死亡率、成栓率、血管直徑及殘余管腔橫截面積百分比；統(tǒng)計學軟件采用SPSS17.0,計量資料采用均數(shù)±標準差(x±s)；組間兩兩比較采用單因素方差分析、用LSD法(最小二乘法),*p0.05有統(tǒng)計學意義。實驗二、狹窄法造模后局部靜脈及血栓的組織學表現(xiàn)1.實驗分組：大鼠80只,按隨機分組原則分正常組(n=20)、假手術組(n=20)、DVT模型組(n=20)及模型干預組(n=20),采用下腔靜脈狹窄法制備深靜脈血栓模型,模型干預組在造模前24h和造模后分別腹腔注射還原型谷胱甘肽660mg/Kg;用外徑0.9mm (20G)注射器針頭控制DVT造模后殘余管腔橫截面積百分比在9.9%±1.7%范圍內。2.大鼠血液及下腔靜脈組織取材：在造模后24h時將大鼠過量麻醉,開腹后行腹主動脈采血,將獲得的大鼠抗凝全血離心后取血漿置于-80℃凍存；采血后取結扎線至髂總靜脈分叉處之間下腔靜脈及其內容物并分成兩份,一份置于4%多聚甲醛中保存做病理切片,另一份置于-80℃凍存。3.指標測定和統(tǒng)計學分析：統(tǒng)計大鼠成栓率、血栓濕重、血栓長度和血栓濕重/長度比值；統(tǒng)計學軟件采用SPSS17.0,計量資料采用均數(shù)±標準差(x±s)；組間兩兩比較采用單因素方差分析,用LSD法(最小二乘法),*p0.05有統(tǒng)計學意義。第二部分：大鼠DVT模型靜脈組織中]HIF-1α、VEGF和MDA的mRNA表達變化1.TBA法檢測各組大鼠靜脈組織內MDA的含量,間接反應氧化應激的水平。2.Triz ol法提取每組大鼠下腔靜脈中總RNA, RT-PCR將各組大鼠靜脈組織RNA逆轉錄為cDNA；以GAPDH為內參照,用Real-time PCR法檢測HIF-1α和、mRNA的表達變化。3.統(tǒng)計學分析：統(tǒng)計學軟件采用SPSS17.0。計量資料采用均數(shù)±標準差(x±s)；組間兩兩比較采用單因素方差分析,用LSD法(最小二乘法),*p0.05有統(tǒng)計學意義。[結果]第一部分：大鼠下腔靜脈狹窄法構建瘀滯型DVT動物模型實驗一、大鼠下腔靜脈狹窄法確定IVC殘余管腔橫截面積百分比1.三組大鼠死亡率分別為6.67%、6.67%、0%；成栓率分別為92.9%、92.9%、57.1%。2.三組大鼠血管外直徑測量值分別為2.84±0.38mm、2.90±0.28mm、2.86±0.29mm(*p0.05)；所對應造模后殘余管腔橫截面積百分比分別為6.4%±1.6%、9.9%±1.7%、18.1%±3.9%。實驗二、狹窄法造模后局部靜脈及血栓的組織學表現(xiàn)1.HE染色切片：正常組與假手術組均表現(xiàn)為整個血管內膜表面完整,內皮細胞排列整齊、大小均勻,管腔中無血栓形成；DVT模型組鏡下可見完全性血栓形成,部分與血管壁粘連,血栓內主要成分為血小板梁、纖維素和紅細胞,同時可見明顯炎性細胞侵潤血管壁和血栓組織；DVT模型GSH干預組中成栓者鏡下可見完全性血栓形成,部分與血管壁粘連,血栓內主要成分為血小板梁、纖維素和紅細胞,同時可見炎性細胞侵潤血管壁和血栓組織,而未成栓者見整個血管內膜表面完整,內皮細胞排列整齊、大小均勻,管腔中無血栓形成,但可見炎性細胞侵潤血管壁。2.大鼠成栓率：模型組和模型干預組均與正常組和假手術組有差異(*p0.05)；而模型干預組較模型組成栓率明顯下降(*p0.05)。3.大鼠血栓長度：除正常對照組與假手術組之間無統(tǒng)計學意義(*p0.05),其余兩兩之間均有統(tǒng)計學意義(*p0.05),其中DVT模型組的血栓長度最大,DVT模型干預組次之。4.大鼠血栓濕重：除正常對照組與假手術組之間無統(tǒng)計學意義(*p0.05),其余兩兩之間均有統(tǒng)計學意義(*p0.05),其中DVT模型干預組較DVT模型組升高。5.大鼠血栓濕重/長度比值：DVT模型干預組較模型組升高,有統(tǒng)計學意義(*p0.05)。第二部分：大鼠DVT模型靜脈組織中HIF-1α、VEGF和MDA的mRNA表達變化1.MDA的含量在DVT模型組和模型干預組中升高(*p0.05),其中DVT模型組最高,模型干預組次之,但二者之間無統(tǒng)計學意義(*p0.05)。2.HIF-1αmRNA在模型組中的表達均高于正常組和假手術組(*p0.05),而在模型干預組中的表達則低于模型組(*p0.05);VECF mRNA在模型組中的表達均高于正常組和假手術組(*p0.05),而在模型干預組中的表達則低于模型組(*p0.05)。[結論]1.下腔靜脈狹窄法可有效建立大鼠DVT模型。2.大鼠下腔靜脈DVT造模時,殘余管腔橫截面積百分比控制為9.9%±1.7%,成栓較為穩(wěn)定。3.還原型谷胱甘肽可能會降低深靜脈血栓形成的成栓率。4.HIF-1α、VEGF對DVT形成的影響可能與氧化應激過程相關。
【關鍵詞】：氧化應激 缺氧誘導因子1α 血管內皮生長因子 深靜脈血栓
【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R543.6
【目錄】：

• 中文摘要5-9
• 英文摘要9-13
• 中英文縮略詞筒表13-15
• 前言15-19
• 第一部分 大鼠下腔靜脈狹窄法構建瘀滯型DVT動物模型19-45
• 實驗一 大鼠下腔靜脈狹窄法確定IVC殘余管腔橫截面積百分比19-26
• 材料與方法19-24
• 結果24-26
• 實驗二 狹窄法造模后局部靜脈及血栓的組織學表現(xiàn)26-45
• 材料與方法26-32
• 結果32-38
• 討論38-44
• 結論44-45
• 第二部分 檢測MDA和HIF-α、VEGF mRNA在大鼠下腔靜脈中的含量及表達變化45-60
• 材料與方法45-52
• 結果52-56
• 討論56-59
• 結論59-60
• 參考文獻60-65
• 綜述165-71
• 參考文獻68-71
• 綜述271-79
• 參考文獻76-79
• 在讀期間基本情況79-80
• 致謝80

【參考文獻】

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1 李學娟，劉政;大鼠和小鼠腹主動脈穿刺采血法[J];上海實驗動物科學;1995年04期

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本文編號：701046