發(fā)布時(shí)間：2017-07-17 06:18

  本文關(guān)鍵詞：偏硅酸鈉抑制高脂飼料喂養(yǎng)所致大鼠血管內(nèi)膜損傷的機(jī)制研究

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【摘要】：動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)是全世界因心血管疾病導(dǎo)致死亡的主要原因。研究認(rèn)為,動(dòng)脈粥樣硬化是由多種炎癥因子參與的慢性炎癥反應(yīng)過程,涉及血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞、血小板功能改變等,并能最終導(dǎo)致斑塊破裂,血栓形成。而諸多的心血管危險(xiǎn)因素可造成內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷,并成為動(dòng)脈硬化發(fā)展的關(guān)鍵始動(dòng)環(huán)節(jié)。據(jù)報(bào)道,硅化物是防治心血管系統(tǒng)疾病的有效成分并能維持血管壁的彈性。本實(shí)驗(yàn)室以往研究證實(shí)Na_2SiO_3能減輕家兔動(dòng)脈硬化程度。NADPH氧化酶4(NADPH oxidative enzyme 4,Nox4)是血管活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)生成最重要的來源,ROS可直接激活核轉(zhuǎn)錄因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)或其他途徑間接使NF-κB活化,從而引起一系列炎癥因子的改變,進(jìn)而影響血管內(nèi)皮的結(jié)構(gòu)及功能。有研究表明,內(nèi)源性ROS能通過調(diào)節(jié)NF-κB的激活,繼而引起單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)表達(dá)的增加。本實(shí)驗(yàn)主要從氧化應(yīng)激-炎癥通路探討Na_2SiO_3是否通過Nox4/NF-κB通路發(fā)揮抑制高脂飼料喂養(yǎng)大鼠的主動(dòng)脈內(nèi)膜損傷的作用。目的:本實(shí)驗(yàn)通過喂養(yǎng)高脂飼料聯(lián)合注射維生素D3建立動(dòng)物模型,研究Na_2SiO_3防治高脂飼料喂養(yǎng)大鼠血管內(nèi)膜損傷的作用機(jī)制。通過觀察血清中指標(biāo),組織形態(tài)學(xué)改變,判斷Na_2SiO_3對高脂飼料喂養(yǎng)大鼠血脂及血管內(nèi)膜損傷的影響。利用免疫組化與分子生物學(xué)技術(shù)檢測NF-κB-p65、Nox4和MCP-1的水平等指標(biāo),探討Na_2SiO_3防治高脂飼料喂養(yǎng)大鼠血管內(nèi)膜損傷的潛在機(jī)制。方法:清潔級雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠隨機(jī)分成5組(n=7),分別為:對照組、模型組、低硅組(Na_2SiO_3 5mg/kg)、高硅組(Na_2SiO_310mg/kg)和他汀組(5mg/kg)。適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,模型組和藥物干預(yù)組一次性腹腔注射維生素D3(60萬IU/kg),同時(shí)開始以高脂飼料喂養(yǎng),并于實(shí)驗(yàn)第4周再次腹腔注射維生素D3 30萬IU/kg(隔天一次,分3次注射)。低硅組、高硅組分別給予不同劑量濃度(5mg/kg,10mg/kg)的Na_2SiO_3溶液灌胃,他汀組給予辛伐他汀(5mg/kg)灌胃,對照組和模型組給予等體積生理鹽水灌胃,實(shí)驗(yàn)持續(xù)10周。實(shí)驗(yàn)最后禁食24h,稱重后用3%水合氯醛麻醉,取血,沿脊柱分離主動(dòng)脈;取1×1cm大小的肝組織。主動(dòng)脈及肝臟都分為兩份,一份于4%的多聚甲醛溶液中固定,另一份組織迅速置于液氮,隨后轉(zhuǎn)入-80℃冰箱中保存。采用生物化學(xué)技術(shù)檢測血清中TG、TC、LDL、HDL的含量。對大鼠肝和主動(dòng)脈組織進(jìn)行HE染色。利用免疫組化和western blot方法測定大鼠腹主動(dòng)脈組織Nox4、NF-κB-p65蛋白水平,RT-PCR和western blot方法檢測MCP-1蛋白和m RNA的表達(dá)。結(jié)果:1 Na_2SiO_3對高脂飼料喂養(yǎng)的大鼠血清TG、TC、LDL、HDL水平的影響血清檢測結(jié)果顯示,模型組大鼠的TG相比于對照組,有明顯升高;低硅、高硅組與模型組相比均無明顯降低;他汀組與模型組相比有顯著降低。模型組大鼠的血清TC相比于對照組,有顯著升高;與模型組相比,低硅、高硅、他汀組均有明顯降低。模型組大鼠血清LDL與對照組相比,有顯著升高;與模型組相比,低硅、高硅、他汀組血清LDL均顯著降低。模型組大鼠血清HDL與對照組相比明顯升高,與模型組相比,低硅組血清HDL未明顯降低;高硅、他汀組血清HDL均明顯降低。2 Na_2SiO_3對高脂飼料喂養(yǎng)大鼠肝組織形態(tài)學(xué)的影響HE結(jié)果顯示,與正常組相比,模型組肝細(xì)胞內(nèi)可見較多的空泡變性;與模型組相比,不同劑量硅組、他汀組肝細(xì)胞空泡變性數(shù)目減少。3 Na_2SiO_3對高脂飼料喂養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈組織形態(tài)學(xué)的影響HE結(jié)果顯示,與正常組血管相比,模型組血管內(nèi)膜明顯增厚,動(dòng)脈中層平滑肌細(xì)胞排列紊亂,局部有鈣化;低硅組血管內(nèi)膜排列較整齊,內(nèi)膜局部輕微增生;高硅組血管內(nèi)膜光滑平整,無增厚,中層平滑肌細(xì)胞排列整齊;他汀組血管內(nèi)膜較光滑。4 Na_2SiO_3對高脂飼料喂養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈組織Nox4的蛋白表達(dá)影響免疫組化結(jié)果顯示,在正常組的血管組織中,血管內(nèi)皮及平滑肌細(xì)胞的Nox4表達(dá)較少;模型組Nox4表達(dá)升高;低硅、高硅及他汀組相比于模型組都有不同程度的降低。Western blot結(jié)果顯示,對照組Nox4的蛋白表達(dá)量較少;模型組蛋白表達(dá)明顯增加;而不同劑量硅組的Nox4的蛋白表達(dá)量顯著下調(diào)。5 Na_2SiO_3對高脂飼料喂養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈組織NF-κB-p65蛋白表達(dá)與活化影響免疫組化結(jié)果顯示,對照組中NF-κB-p65呈彌散分布在細(xì)胞質(zhì)中;模型組中NF-κB-p65表達(dá)明顯增加,并主要分布于細(xì)胞核內(nèi);不同劑量硅組和他汀組的血管組織中NF-κB-p65的表達(dá)較少。Western blot結(jié)果顯示,對照組NF-κB-p65的蛋白表達(dá)量較少;模型組NF-κB-p65總蛋白和核蛋白水平均明顯增加;不同劑量硅組和他汀組NF-κB-p65總蛋白和核蛋白水平均明顯下降。6 Na_2SiO_3對高脂飼料喂養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈組織MCP-1蛋白及m RNA水平的影響Western blot結(jié)果顯示,對照組MCP-1的蛋白表達(dá)量較少;模型組蛋白表達(dá)明顯增加;而低硅、高硅、他汀組MCP-1的蛋白表達(dá)量明顯下降。RT-PCR結(jié)果顯示,與對照組相比,模型組MCP-1 m RNA表達(dá)增加;低硅、高硅、他汀組均可以減弱高脂飼料喂養(yǎng)的大鼠的MCP-1 m RNA的表達(dá)水平。結(jié)論:Na_2SiO_3對高脂飼料喂養(yǎng)大鼠的血管具有保護(hù)作用,機(jī)制可能與抑制Nox4/NF-κB/MCP-1信號通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：Na2SiO_3 動(dòng)脈粥樣硬化 高脂血癥 NADPH氧化酶4 核轉(zhuǎn)錄因子p65 單核細(xì)胞趨化蛋白-1
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R543.5
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 英文縮寫11-12
• 前言12-13
• 材料與方法13-22
• 結(jié)果22-25
• 附圖25-34
• 附表34-37
• 討論37-40
• 結(jié)論40-41
• 參考文獻(xiàn)41-43
• 綜述 No_x家族在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中作用研究43-52
• 參考文獻(xiàn)47-52
• 致謝52-53
• 個(gè)人簡歷53

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3 邱賽紅;李磊;李富元;李琳;殷德良;陳北陽;;鵪鶉動(dòng)脈粥樣硬化模型的制備及辛伐他汀作用的觀察[A];中華中醫(yī)藥學(xué)會中藥實(shí)驗(yàn)藥理分會第八屆學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2009年

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本文編號：552341