本文關(guān)鍵詞：HSP22對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞損傷及相關(guān)的保護(hù)機(jī)制研究

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【摘要】：目的:觀察HSP22與PPARγ激動(dòng)劑在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)功能和單核細(xì)胞的粘附中的影響,并研究其可能機(jī)制。方法:(1)用不同濃度的ox-LDL處理HUVECs 24h,用免疫印記技術(shù)(Western blot)分別檢測(cè)HUVECs e NOS、ICAM1、HSP22、PPARγ蛋白表達(dá)情況,觀察劑量效應(yīng)。(2)用HSP22shRNA干擾組、HSP22質(zhì)粒過表達(dá)組、HSP22空載組轉(zhuǎn)染HUVECs 48h,再加入80ug/mL ox-LDL處理24h,檢測(cè)指標(biāo)同前(1),同時(shí)用熒光顯微鏡和酶標(biāo)儀檢測(cè)單核細(xì)胞的粘附情況。(3)PBS空白組、不同濃度(0μM/L,1μM/L,10μM/L,30μM/L)PPARγ激動(dòng)劑比格列酮預(yù)處理HUVECs12h,再加入80ug/mL ox-LDL處理24h,Western blot檢測(cè)HSP22蛋白,了解HSP22與PPARγ的可能關(guān)系。(4)用HSP22質(zhì)粒過表達(dá)轉(zhuǎn)染兩組HUVECs 48h,分別用PPARγ抑制劑T0070907 10nM/L、PBS預(yù)處理12h,再加入80ug/m L ox-LDL處理24h,用Western blot分別檢測(cè)HUVECs eNOS、ICAM1蛋白表達(dá)情況,用熒光顯微鏡和酶標(biāo)儀檢測(cè)單核細(xì)胞的粘附情況。結(jié)果:1、ox-LDL合適的干預(yù)濃度:隨著ox-LDL處理濃度的增加,eNOS蛋白表達(dá)顯著下降(P0.05)、HSP22、PPARγ蛋白表達(dá)升高(P0.05)、ICAM1表達(dá)明顯升高(P0.05)。2、HSP22蛋白對(duì)內(nèi)皮功能及單核細(xì)胞粘附的影響:在相同干預(yù)條件下,HSP22蛋白過表達(dá)組ICAM1蛋白明顯低于空載組與HSP22shRNA組(P0.05),eNOS蛋白明顯高于其他兩組(P0.05),對(duì)單核細(xì)胞的粘附明顯低于其他兩組(P0.05),各組PPARγ蛋白及mRNA無明顯變化。3、HUVEC中HSP22與PPARγ的關(guān)系:隨著PPARγ激動(dòng)劑比格列酮處理濃度的增加,ICAM1表達(dá)下降(P0.05),eNOS表達(dá)升高(P0.05),HSP22表達(dá)下降(P0.05)。4、HSP22對(duì)ox-LDL處理的HUVEC的內(nèi)皮功能及對(duì)單核細(xì)胞粘附影響的可能機(jī)制:在相同干預(yù)條件下,HSP22過表達(dá)+PPARγ抑制劑組的炎癥因子ICAM1蛋白較HSP22過表達(dá)組增加,對(duì)單核細(xì)胞的粘附增加,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。eNOS蛋白無明顯變化。結(jié)論:1、ox-LDL損傷HUVECs并可誘導(dǎo)HSP22、PPARγ、ICAM1表達(dá)增加,降低eNOS表達(dá)。2、HSP22可抑制在ox-LDL誘導(dǎo)環(huán)境下HUVEC炎癥因子ICAM1產(chǎn)生和對(duì)單核細(xì)胞的粘附并促進(jìn)eNOS表達(dá),改善內(nèi)皮功能,對(duì)PPARγ表達(dá)未見明顯影響。3、PPARγ激動(dòng)劑比格列酮可抑制ox-LDL誘導(dǎo)環(huán)境下HUVEC炎癥因子ICAM1產(chǎn)生并促進(jìn)eNOS表達(dá),對(duì)HSP22的表達(dá)未見明顯影響。4、HSP22對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞功能損傷的所起的保護(hù)作用可能與PPARγ的抗炎通路關(guān)系不大。
【關(guān)鍵詞】：HSP22 HUVECs ox-LDL PPARγ eNOS
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R54
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-9
• 中英文縮略詞表9-11
• 第1章 引言11-14
• 第2章 材料與方法14-27
• 2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料和試劑14-16
• 2.1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株14
• 2.1.2 主要儀器設(shè)備14-15
• 2.1.3 主要試劑15-16
• 2.1.4 試劑配制16
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法16-26
• 2.2.1 培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞與人外周血單核細(xì)胞系16-17
• 2.2.2 ox-LDL及PPARγ 抑制劑、激動(dòng)劑分別與HUVECs孵育17
• 2.2.3 質(zhì)粒DNA提取17-19
• 2.2.4 DNA的產(chǎn)量與質(zhì)量檢測(cè)：19
• 2.2.5 轉(zhuǎn)染19
• 2.2.6 分組培養(yǎng)19
• 2.2.7 Western blot操作步驟19-23
• 2.2.8 熒光定量RT-PCR檢測(cè)mRNA表達(dá)23-25
• 2.2.9 單核細(xì)胞粘附實(shí)驗(yàn)25-26
• 2.3 數(shù)據(jù)處理26-27
• 第3章 結(jié)果27-37
• 3.1 不同濃度ox-LDL對(duì)HUVEC中ICAM1、eNOS、HSP22及PPARγ 蛋白表達(dá)的影響27-28
• 3.2 HSP22對(duì)內(nèi)皮功能與其激活及對(duì)單核細(xì)胞的粘附的影響28-33
• 3.2.1 HSP22質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后的效率及HSP22表達(dá)28-30
• 3.2.2 HSP22對(duì)HUVEC中PPARγmRNA的影響30-31
• 3.2.3 HSP22對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮功能及其激活的影響31-32
• 3.2.4 HSP22的表達(dá)對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)內(nèi)皮對(duì)單核細(xì)胞粘附的影響32-33
• 3.3 PPARγ 激動(dòng)劑比格列酮對(duì)HSP22表達(dá)的影響33-34
• 3.4 HSP22蛋白對(duì)ox-LDL處理的HUVEC細(xì)胞內(nèi)皮功能與激活及其對(duì)單核細(xì)胞粘附影響的可能機(jī)制34-37
• 3.4.1 HSP22蛋白對(duì)ox-LDL處理的HUVEC細(xì)胞ICAM1和eNOS表達(dá)影響的機(jī)制34-36
• 3.4.2 HSP22的表達(dá)對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的HUVEC對(duì)THP1細(xì)胞粘附的影響36-37
• 第4章 討論37-41
• 4.1 HSP22在ox-LDL誘導(dǎo)環(huán)境下的表達(dá)37-38
• 4.2 HSP22與ICAM1、eNOS38-39
• 4.3 PPARγ 與ICAM1、eNOS39-40
• 4.4 HSP22與PPARγ40-41
• 第5章 結(jié)論與展望41-42
• 5.1 結(jié)論41
• 5.2 不足之處41-42
• 致謝42-43
• 參考文獻(xiàn)43-47
• 綜述 Sirt1與動(dòng)脈粥樣硬化的研究進(jìn)展47-56
• 參考文獻(xiàn)54-56

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