目的觀察let-7f在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞炎癥反應(yīng)過程中的變化規(guī)律,探討let-7f參與動(dòng)脈粥樣硬化起始發(fā)病過程的分子機(jī)制。方法采用雙抗體夾心ELISA方法觀察不同劑量ox-LDL處理血管內(nèi)皮細(xì)胞時(shí)細(xì)胞間粘附分子1(ICAM-1)的表達(dá)變化情況,RT-qPCR檢測不同劑量ox-LDL處理血管內(nèi)皮細(xì)胞時(shí)let-7f的表達(dá)變化規(guī)律,Western blot法分析不同劑量ox-LDL處理血管內(nèi)皮細(xì)胞時(shí)核因子κB(NF-κB)的核移位情況和ox-LDL對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞A20表達(dá)及NF-κB通路活化的影響,雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)檢測let-7f與A20基因的3’-UTR靶向結(jié)合,Western blot法檢測let-7f對(duì)A20表達(dá)的調(diào)控。結(jié)果 20μg/ml ox-LDL可導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液中ICAM-1的含量明顯升高,血管內(nèi)皮細(xì)胞let-7f的表達(dá)明顯上調(diào)(均為P<0.05),且隨著ox-LDL作用劑量的增加,ICAM-1與let-7f的表達(dá)變化均呈現(xiàn)明顯的劑量效應(yīng)關(guān)系。此外,20μg/ml ox-LDL可導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞NF-κB向核內(nèi)移位,隨著ox-L...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 實(shí)驗(yàn)方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
        1.2.2 分組
        1.2.3 RNA的提取和實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        1.2.4 雙抗體夾心ELISA方法檢測細(xì)胞培養(yǎng)液ICAM-1含量
        1.2.5 細(xì)胞核蛋白的制備
        1.2.6 Western blot法檢測細(xì)胞核中NF-κB含量的變化
        1.2.7 Western blot法檢測細(xì)胞中A20、p-IKK、NF-κB和p-NF-κB的變化
        1.2.8 雙熒光素酶報(bào)告實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證let-7f與A20的靶向關(guān)系
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
2 結(jié)果
    2.1 ox-LDL對(duì)HUVEC細(xì)胞ICAM-1表達(dá)的影響
    2.2 ox-LDL對(duì)HUVEC細(xì)胞let-7f表達(dá)的影響
    2.3 ox-LDL對(duì)HUVEC細(xì)胞核NF-κB蛋白含量的影響
    2.4 ox-LDL對(duì)HUVEC細(xì)胞A20表達(dá)及NF-κB通路的影響
    2.5 let-7f與A20基因3’-UTR靶向結(jié)合并抑制其表達(dá)
3 討論



本文編號(hào)：4047113