第一部分Kir2.1-shRNA慢病毒載體的構(gòu)建包裝及其對大鼠血管平滑肌細(xì)胞Kir2.1基因敲減效率的測定目的首先構(gòu)建針對SD大鼠內(nèi)向整流鉀離子通道2.1 （inwardly rectify K+channel2.1,Kir2.1）基因的特異性短發(fā)卡 RNA （short hairpin RNA, shRNA）表達(dá)的慢病毒（Lentivirus, LV）干擾載體,然后轉(zhuǎn)染大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞（rat thoracic aorta vascular smooth muscle cells , RASMCs）檢測慢病毒對 Kir2.1基因敲減的效率。方法根據(jù)GenBank公布的NM₀17296.1序列確定四條針對Kir2.1基因cds區(qū)的小干擾 RNA （small interfering, siRNA）序列（shRNAl-4）,同時設(shè)計一條陰性對照序列用于shRNA陰性對照（Negative Control, NC）,共組建與shRNA相對應(yīng)的5條互補(bǔ)的單鏈DNA。慢病毒顆粒由包裝質(zhì)粒pGag/Pol、pRev、pVSV-G和shRNA重組穿梭質(zhì)粒組成,進(jìn)行測序鑒定...

【文章頁數(shù)】：120 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
英文摘要
縮略語
前言
文獻(xiàn)綜述
    綜述-1 血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)換機(jī)制的研究進(jìn)展
    綜述-2 內(nèi)向整流鉀離子通道Kir2.1的研究進(jìn)展
第一部分 Kir2.1-shRNA慢病毒載體的構(gòu)建包裝及其對大鼠血管平滑肌細(xì)胞Kir2.1基因敲減效率的測定
    1.1 前言
    1.2 試劑與器材
    1.3 主要實(shí)驗(yàn)方法
    1.4 結(jié)果
    1.5 討論
    1.6 結(jié)論
第二部分 Kir2.1-shRNA-Lv介導(dǎo)的Kir2.1基因沉默對PDGF-BB誘導(dǎo)的RASMCs增殖、遷移及表型蛋白影響研究
    2.1 前言
    2.2 試劑與器材
    2.3 主要實(shí)驗(yàn)方法
    2.4 結(jié)果
    2.5 討論
    2.6 結(jié)論
第三部分 慢病毒介導(dǎo)的Kir2.1基因沉默對大鼠頸動脈球囊損傷新生內(nèi)膜影響的研究
    3.1 前言
    3.2 試劑與器材
    3.3 主要實(shí)驗(yàn)方法
    3.4 結(jié)果
    3.5 討論
    3.6 結(jié)論
第四部分 Kir2.1參與調(diào)控PDGF-BB誘導(dǎo)的RASMCs表型轉(zhuǎn)換的機(jī)制研究
    4.1 前言
    4.2 試劑與器材
    4.3 主要實(shí)驗(yàn)方法
    4.4 結(jié)果
    4.5 討論
    4.6 結(jié)論
全文總結(jié)及展望
參考文獻(xiàn)
致謝
作者簡介
在學(xué)期間發(fā)表的主要學(xué)術(shù)論文



本文編號：4009681