在突發(fā)性的心血管事件中,及時恢復(fù)血流供應(yīng)是挽救缺血心肌的關(guān)鍵措施,如冠狀動脈搭橋術(shù)(bypass operation of coronary artery,CABG),心肌梗死溶栓(myocardial infarction thrombolysis)、冠脈痙攣(coronary artery spasm)及心搏驟停行心肺復(fù)蘇等,但血流恢復(fù)過程中,大量伴隨的病理事件加重了心肌損傷,即心肌缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)損傷。I/R損傷是心血管病中一個重要的病理過程,其機制至今未完全明確,除了炎性反應(yīng)、鈣超載、活性氧(reactive oxygen,ROS)和線粒體功能障礙等有關(guān)因素外,同時發(fā)現(xiàn)細胞膜離子通道蛋白的功能改變與I/R損傷有關(guān),但目前確切的作用與機制尚不清楚。所以,進一步探討心肌I/R損傷過程中離子通道的作用和機制,為臨床I/R損傷的相關(guān)疾病提供新的、有效的治療策略具有重要價值。自噬(autophagy)是細胞在營養(yǎng)缺乏或應(yīng)激時降解自身蛋白和受損細胞器并經(jīng)溶酶體包裹、消化,進行物質(zhì)再循環(huán)利用的一種自我保護方式,在調(diào)控細胞損傷、老化和維護細胞內(nèi)環(huán)...

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
縮略語表
中文摘要
ABSTRACT
前言
文獻回顧
第一部分 構(gòu)建在體大鼠心肌缺血/再灌注損傷模型
    1 材料
        1.1 主要儀器
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 主要試劑配制
        2.2 構(gòu)建在體大鼠缺血/再灌注心肌梗死模型的方案
        2.3 實驗分組
        2.4 心肌酶測定
        2.5 TTC心肌組織染色
        2.6 心臟超聲心功能檢測
        2.7 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 缺血/再灌注損傷對大鼠心肌梗死面積的影響
        3.2 缺血/再灌注損傷對大鼠心臟功能的影響
        3.3 缺血/再灌注對大鼠心肌損傷指標(biāo)的影響
    4 討論
    小結(jié)
第二部分DCPIB對心臟缺血/再灌注損傷過程中自噬水平的影響
    1 材料
        1.1 主要儀器
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 在體心臟缺血/再灌注損傷模型的建立
        2.2 實驗分組
        2.3 心肌組織損傷程度的檢測
        2.4 心肌自噬水平、相關(guān)蛋白及炎性指標(biāo)的檢測
        2.5 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 DCPIB對心臟缺血/再灌注心肌損傷的影響
        3.2 DCPIB對心臟缺血/再灌注損傷心肌過程中自噬水平的調(diào)控
    4 討論
    小結(jié)
第三部分 構(gòu)建模擬缺血/再灌注損傷心肌細胞的模型
    1 材料
        1.1 主要儀器
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 實驗前液體配制
        2.2 原代乳鼠心肌細胞培養(yǎng)和鑒定
        2.3 構(gòu)建模擬缺血/再灌注損傷心肌細胞方案
        2.4 離體缺血/再灌注損傷模型分組
        2.5 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 心肌細胞形態(tài)學(xué)觀察及純度鑒定
        3.2 心肌細胞存活率
    4 討論
    小結(jié)
第四部分DCPIB對缺血/再灌注損傷心肌細胞自噬的調(diào)控及機制
    1 材料
        1.1 主要儀器
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 試劑配制
        2.2 乳鼠心肌細胞培養(yǎng)
        2.3 離體心肌細胞模擬缺血/再灌注損傷模型的建立
        2.4 心肌細胞分組
        2.5 全細胞膜片鉗檢測H2O2對心肌細胞VSOR Cl-電流的影響及DCPIB干預(yù)
        2.6 細胞免疫熒光法檢測LAMP2、LC3蛋白在心肌細胞中的表達
        2.7 缺血/再灌注對心肌細胞內(nèi)ROS水平、凋亡和細胞存活率的影響
        2.8 蛋白印跡法檢測心肌細胞相關(guān)自噬蛋白
        2.9 RNA提取和RT-PCR
        2.10 Beclin1-siRNA對I/R心肌細胞自噬的影響
        2.11 統(tǒng)計學(xué)方法
    3 結(jié)果
        3.1 DCPIB對H2O2刺激心肌細胞ICl,Vol電流的影響
        3.2 DCPIB對模擬缺血/再灌注損傷心肌細胞LAMP2、LC3水平的影響
        3.3 DCPIB對模擬缺血/再灌注損傷心肌細胞Beclin1的mRNA表達的影響
        3.4 DCPIB對模擬缺血/再灌注損傷心肌細胞ROS水平的影響
        3.5 DCPIB對模擬缺血/再灌注損傷心肌細胞凋亡的影響
        3.6 DCPIB對模擬缺血/再灌注損傷心肌細胞存活率的影響
        3.7 H₂O₂與DCPIB對模擬缺血/再灌注損傷心肌細胞LAMP2和LC3水平的影響
        3.8 DCPIB對模擬缺血/再灌注損傷心肌細胞LAMP2、NF-κB和自噬水平的影響
        3.9 Beclin1siRNA對模擬缺血/再灌注損傷心肌細胞自噬水平的影響
    4 討論
    小結(jié)
參考文獻
個人簡歷和研究成果
致謝



本文編號：3939174