目的:急性心肌梗死是心血管疾病死亡的重要原因之一,再灌注治療是對其最好的治療方法。即使許多再灌注的患者血液供應得到了恢復,但是心肌組織依然出現了損傷的進行性加重,這種損傷被稱為缺血再灌注損傷。在缺血再灌注損傷諸多因素中,活性氧累積的氧化應激損傷是其核心。因此,通過對氧化應激損傷調控機制的探索,可以為治療缺血再灌注損傷及其他氧化應激引起的心血管疾病提供新的策略。近年來,許多研究證實了泛素-蛋白酶體系統,尤其是E3泛素化連接酶在氧化應激損傷的調控中起到關鍵的作用,cul4a是近期發(fā)現的一種E3泛素化連接酶,與癌癥有著密切的聯系,廣泛參與了細胞生理和病理過程。但是,目前尚沒有研究表明cul4a是否參與到心血管系統疾病中,發(fā)揮怎樣的生理功能和病理作用。因此,本研究擬應用體外心肌細胞實驗,探討cul4a在心肌細胞氧化應激損傷中的作用及分子機制。研究方法:選擇H₂O₂作為H9c2心肌細胞氧化應激損傷的誘導因素,首先用50μM、100μM、200μM、400μM的H₂O₂處理2小時后,利用CCK-8-kit測定其...

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【學位級別】：博士

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摘要
Abstract
英文縮略語
1 前言
2 材料與方法
    2.1 材料與試劑
        2.1.1 細胞系
        2.1.2 抗體
        2.1.3 培養(yǎng)基、檢測試劑盒和相關主要試劑
        2.1.4 實驗溶液
        2.1.5 siRNA序列
        2.1.6 耗材
        2.1.7 主要儀器設備
    2.2 實驗方法
        2.2.1 質粒的構建
        2.2.2 siRNA的構建
        2.2.3 H9c2細胞的復蘇、傳代培養(yǎng)、凍存
        2.2.4 H9c2細胞氧化應激損傷的誘導
        2.2.5 H9c2 細胞系敲減cul4a
        2.2.6 H9c2 細胞中過表達cul4a
        2.2.7 細胞活力測定
        2.2.8 細胞免疫熒光
        2.2.9 AnnexinⅤ-FITC/PI流式細胞術測定細胞凋亡
        2.2.10 Western Blot檢測蛋白的表達量
        2.2.11 免疫共沉淀
        2.2.12 ROS熒光
        2.2.13 統計學分析
3 結果
    3.1 心肌細胞氧化應激損傷上調cul4a表達
    3.2 cul4a對 H₂O₂ 誘導的H9c2 心肌細胞氧化應激損傷的影響
        3.2.1 H9c2 心肌細胞過表達cul4a減輕H₂O₂ 誘導的氧化應激損傷
        3.2.2 H9c2 心肌細胞敲減cul4a加重H₂O₂ 誘導的氧化應激損傷
    3.3 cul4a的表達影響H₂O₂ 誘導的氧化應激損傷中ROS的變化
        3.3.1 H9c2 細胞內ROS水平隨H₂O₂ 誘導的氧化應激損傷程度加重而上升
        3.3.2 H9c2 心肌細胞過表達cul4a降低H₂O₂ 誘導的氧化應激損傷中ROS的水平
        3.3.3 H9c2 心肌細胞敲減cul4a增加H₂O₂ 誘導的氧化應激損傷中ROS的水平
    3.4 H9c2 心肌細胞中cul4a與凋亡相關蛋白PARP-1 的相互作用
        3.4.1 免疫共沉淀實驗確定PARP-1 作為E3 泛素化連接酶cul4a全新的結合蛋白與其相互作用
        3.4.2 在H₂O₂ 誘導的氧化應激損傷中,cul4a與 PARP-1 相互作用增強
    3.5 cul4a作為E3 泛素化連接酶可以降解PARP-1,減少其表達
        3.5.1 梯度過表達cul4a可以使PARP-1 表達水平逐漸降低
        3.5.2 敲減cul4a程度與PARP-1 表達水平增加正相關
4 討論
5 結論
本研究創(chuàng)新性的自我評價
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀學位期間取得的研究成果
致謝
個人簡歷



本文編號：3933068