目的探討將血小板微小RNA(microRNA)表達(dá)譜應(yīng)用于慢性原發(fā)免疫性血小板減少癥(ITP)患者中,研究microRNA在健康群體中以及ITP患者中表達(dá)的差異情況。方法選取2018年6月30日～2019年9月25日在汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院血液科接受治療的ITP患者20例作為臨床研究對(duì)象,并以此為實(shí)驗(yàn)組,再選取20例汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院的健康體檢健康群體為對(duì)照組,每組中選取10例受檢者的血樣進(jìn)行芯片檢測(cè),另10例接受熒光定量PCR檢測(cè)驗(yàn)證。兩組患者的血小板microRNA均應(yīng)用Exqion miRCURY^TM芯片進(jìn)行分析,兩組之間microRNA表達(dá)譜的差異通過(guò)分層聚類(lèi)法進(jìn)行分析,再對(duì)有差異的microRNA應(yīng)用實(shí)時(shí)PCR方法進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果兩組混合樣本中總RNA有清晰的28S以及18S條帶顯現(xiàn)。且A260nm/A280nm比值以及樣品質(zhì)量均符合要求。兩組受檢者之間篩選出161個(gè)microRNA有差異表達(dá),其中顯著下調(diào)的表達(dá)為79個(gè),顯著上調(diào)的表達(dá)為82個(gè)。分層聚類(lèi)分析顯示,兩組受檢者的miRNA表達(dá)譜差異顯著,說(shuō)明實(shí)驗(yàn)組中有特異性microRNA表達(dá)譜存...

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圖1提取的microRNA及總RNA電脈結(jié)果

對(duì)兩組所有受檢者的血小板樣品進(jìn)行microRNA檢測(cè)分析，將microRNA以及總RNA提取后進(jìn)行電泳。說(shuō)明兩組混合樣本中總RNA有清晰的28S以及18S條帶顯現(xiàn)。且A260nm/A280nm比值以及樣品質(zhì)量均符合要求。見(jiàn)圖1。2.2兩組受檢者中microRNA的表達(dá)

圖2miRNA表達(dá)譜差異，下調(diào)以綠色表示，上調(diào)以紅色表示

兩組受檢者之間篩選出161個(gè)microRNA有差異表達(dá)，其中顯著下調(diào)的表達(dá)為79個(gè)，顯著上調(diào)的表達(dá)為82個(gè)。分層聚類(lèi)分析顯示，兩組受檢者的miRNA表達(dá)譜差異顯著，說(shuō)明實(shí)驗(yàn)組中有特異性microRNA表達(dá)譜存在。見(jiàn)圖2。2.3驗(yàn)證目的microRNART-PCR

圖3microRNART-PCR驗(yàn)證結(jié)果，A、B、C分別代表hsa-miR-31、hsa-miR-148a、hsa-miR-181a

miRCURYTMLNAArray(v.16.0）（丹麥Exiqon公司生產(chǎn)）中的探針有1891個(gè)，包括了小鼠、大鼠、人類(lèi)以及之相關(guān)所有病毒的microRNA，芯片選用miRCURYTM探針的技術(shù)基礎(chǔ)為L(zhǎng)NA，在檢測(cè)microRNA表達(dá)譜過(guò)程中具有較強(qiáng)的敏感性以....

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