發(fā)布時(shí)間：2024-02-26 19:48

　　研究目的近年來(lái),世界上糖尿病(diabetes mellitus,DM)患病率急劇上升,DM對(duì)人類的生命健康造成了嚴(yán)重威脅,其中引起糖尿病患者死亡的主要原因之一是心血管并發(fā)癥。糖尿病心肌病(diabetic cardiomyopathy,DCM)是糖尿病心血管并發(fā)癥中公認(rèn)的一種獨(dú)立、特異的心肌病,與糖尿病患者發(fā)生心力衰竭和死亡率升高緊密相關(guān)。心肌纖維化(myocardial fibrosis,MF)又是DCM的主要病理改變之一,心肌成纖維細(xì)胞的過(guò)度增殖以及基質(zhì)蛋白和膠原纖維大量合成是導(dǎo)致MF的主要原因。本課題通過(guò)檢測(cè)1型糖尿病(type 1 diabetes mellitus,T1DM)大鼠心肌組織中F框/WD-40域蛋白(F-box/WD repeat-containing protein7,FBXW7)和Rho A/Rho激酶信號(hào)通路的變化,并通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染人心肌成纖維細(xì)胞(Human cardiac fibroblast,HCFB),進(jìn)一步測(cè)定在高糖培養(yǎng)的HCFB細(xì)胞中干預(yù)FBXW7表達(dá)對(duì)Rho A/Rho激酶信號(hào)通路的影響,明確FBXW7通過(guò)Rho A/Rho激酶信號(hào)通路調(diào)控M...

【文章頁(yè)數(shù)】：82 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
研究生導(dǎo)師及課題指導(dǎo)小組成員介紹
主要符號(hào)表
摘要
ABSTRACT
第一章 前言
    1.1 糖尿病心肌病
    1.2 心肌纖維化
    1.3 氧化應(yīng)激
    1.4 RhoA/Rho激酶信號(hào)通路在DM大鼠心肌損傷中的研究進(jìn)展
    1.5 FBXW7的研究進(jìn)展
    1.6 本課題研究目的和意義
第二章 FBXW7及RhoA/Rho激酶信號(hào)通路在DCM中的變化
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 試劑
        2.1.3 主要試劑配制
        2.1.4 主要儀器設(shè)備
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 動(dòng)物模型的建立
        2.2.2 血糖監(jiān)測(cè)
        2.2.3 心肌標(biāo)本采集及保存
        2.2.4 蘇木素-伊紅(HE)染色法
        2.2.5 Masson三色染色法
        2.2.6 堿水解法法檢測(cè)心肌組織中羥脯氨酸(HYP)含量
        2.2.7 Elisa法檢測(cè)血清中FBXW7、TGF-β1、CTGF含量
        2.2.8 血清中SOD和MDA含量測(cè)定
        2.2.9 免疫組織化學(xué)法(IHC)
        2.2.10 Western blotting(WB)
        2.2.11 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 糖尿病大鼠模型建立狀況
        2.3.2 糖尿病大鼠體重、心臟各指標(biāo)及FBG水平的測(cè)定結(jié)果
        2.3.3 糖尿病大鼠心肌組織的HE染色結(jié)果
        2.3.4 糖尿病大鼠心肌組織的Masson染色結(jié)果
        2.3.5 糖尿病大鼠心肌組織的膠原含量
        2.3.6 糖尿病大鼠血清中的FBXW7、TGF-β1、CTGF含量
        2.3.7 糖尿病大鼠血清中的SOD活力和MDA含量
        2.3.8 糖尿病大鼠心肌組織的免疫組化結(jié)果
        2.3.9 糖尿病大鼠心肌組織中FBXW7、RhoA及 ROCK1 蛋白表達(dá)量變化
    2.4 討論
第三章 FBXW7調(diào)控RhoA/Rho激酶信號(hào)通路對(duì)糖尿病心肌纖維化的影響
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 細(xì)胞株
        3.1.2 基因干擾序列
        3.1.3 試劑及材料
        3.1.4 主要儀器設(shè)備
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及分組
        3.2.2 建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)或干擾FBXW7 細(xì)胞株
        3.2.3 qRT-PCR檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)FBXW7、RhoA、ROCK1 mRNA水平
        3.2.4 Western blotting檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)FBXW7、RhoA、ROCK1蛋白表達(dá)
        3.2.5 消化法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)羥脯氨酸(HYP)含量
        3.2.6 Elisa法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)TGF-β1、CTGF含量
        3.2.7 細(xì)胞內(nèi)SOD、MDA含量的檢測(cè)
        3.2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 慢病毒轉(zhuǎn)染人心肌成纖維細(xì)胞的情況
        3.3.2 干預(yù)FBXW7表達(dá)對(duì)RhoA、ROCK1 mRNA水平的影響
        3.3.3 干預(yù)FBXW7表達(dá)對(duì)RhoA、ROCK1蛋白表達(dá)的影響
        3.3.4 干預(yù)FBXW7表達(dá)對(duì)細(xì)胞內(nèi)膠原含量的影響
        3.3.5 干預(yù)FBXW7表達(dá)對(duì)細(xì)胞內(nèi)TGF-β1、CTGF含量的影響
        3.3.6 干預(yù)FBXW7表達(dá)對(duì)細(xì)胞內(nèi)SOD、MDA含量的影響
    3.4 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
附錄



本文編號(hào)：3911767