目的心肌梗死嚴重威脅著人們的生命與健康,給家庭和社會帶來了沉重的經(jīng)濟負擔。迄今為止,對于心肌梗死的治療尚無理想措施。干細胞移植是目前最有前景的治療手段,但仍存在移植后細胞存活率低、難以向心肌細胞分化等關鍵性問題,這嚴重地影響了干細胞移植治療的效果。因此,制定有效地干細胞移植治療措施是亟待解決的首要問題。本研究利用承載MSCs或Tβ4過表達MSCs (Tβ4-MSCs)的納米纖維補片移植治療心肌梗死,探討PG納米纖維補片和Tβ4過表達對外源性和內源性心肌修復的促進作用及其機制,以期為干細胞移植治療的深入開展和臨床應用提供新思路和可行性實驗依據(jù)。方法采用高分子材料PCL和天然生物材料明膠靜電紡絲制備PG納米纖維,利用體外三維培養(yǎng)系統(tǒng)評價PG納米纖維與細胞的相容性。通過建立體外低氧模型模擬體內缺血缺氧微環(huán)境,評價低氧和營養(yǎng)剝奪條件下PG對MSCs存活及增殖活性的影響。建立雌性大鼠心肌梗死模型,于梗死后1周移植承載表達GFP的雄性大鼠MSCs的PG納米纖維補片。移植后4周通過超聲心動圖檢測大鼠心功能變化。用HE和Masson三色染色觀察大鼠左心室壁的形態(tài)和組織學變化,測量左心室壁厚度。采用CD...

【文章頁數(shù)】：89 頁

【學位級別】：博士

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縮略詞表
中文摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 PG納米纖維制備及其體外實驗研究
    引言
    1 儀器和試劑
        1.1 主要儀器
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 MSCs的分離和培養(yǎng)
        2.2 PG納米纖維制備及其特性研究
        2.3 PG對細胞生物學特性的影響
        2.4 PG對細胞存活和增殖活性的影響
        2.5 PG對低氧條件下細胞存活及增殖活性的影響
        2.6 統(tǒng)計學處理
    3 結果
        3.1 PG的表面形態(tài)特征
        3.2 PG在細胞生物學特性方面的作用
        3.3 PG對細胞存活和增殖活性的促進作用
        3.4 PG對低氧條件下細胞存活和增殖活性的保護作用
    4 討論
第二部分 PG納米纖維承載MSCs移植治療大鼠心肌梗死的實驗研究
    引言
    1 儀器和試劑
        1.1 主要儀器
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 納米纖維干細胞片制備
        2.2 大鼠心肌梗死模型建立與納米纖維干細胞片移植
        2.3 心功能檢測
        2.4 組織學檢測
        2.5 免疫組織化學染色
        2.6 移植細胞存活和分化檢測
        2.7 內源性干/祖細胞激活和動員的檢測
        2.8 PCR檢測
        2.9 統(tǒng)計學處理
    3 結果
        3.1 最佳MOI的確定和轉染效率
        3.2 納米纖維干細胞片移植對心功能改善的作用
        3.3 納米纖維干細胞片移植后左心室壁結構變化
        3.4 納米纖維干細胞片促進梗死組織的血管新生
        3.5 納米纖維干細胞片移植后的淋巴管新生變化
        3.6 納米纖維干細胞片促進梗死組織的心肌再生
        3.7 納米纖維干細胞片在外源性心肌修復中的作用
        3.8 納米纖維干細胞片在內源性心肌修復中的作用
    4 討論
第三部分 PG承載Tβ4過表達MSCs移植對內源性心肌修復的促進作用
    引言
    1 儀器和試劑
        1.1 主要儀器
        1.2 主要試劑
    2 方法
        2.1 Tβ4基因重組慢病毒表達載體的構建
        2.2 慢病毒轉染MSCs
        2.3 Tβ4基因表達檢測
        2.4 Tβ4蛋白表達檢測
        2.5 納米纖維干細胞片制備
        2.6 納米纖維干細胞片移植
        2.7 心功能檢測
        2.8 組織學檢測
        2.9 免疫組織化學染色
        2.10 統(tǒng)計學處理
    3 結果
        3.1 重組質粒GV205的鑒定
        3.2 慢病毒滴度測定結果
        3.3 轉染重組慢病毒載體后MSCs的Tβ4 mRNA表達水平
        3.4 轉染重組慢病毒載體后MSCs的Tβ4蛋白表達水平
        3.5 Tβ4過表達對心功能改善的促進作用
        3.6 Tβ4過表達對左心室壁組織結構變化的影響
        3.7 Tβ4過表達對移植細胞存活和分化的作用
        3.8 Tβ4過表達對內源性心肌修復的促進作用及其機制
    4 討論
全文小結
課題創(chuàng)新性
參考文獻
綜述
    參考文獻
致謝
附錄



本文編號：3874211