目的探討CML/RAGE信號在動脈粥樣硬化和非酒精性脂肪肝進(jìn)展中的作用。方法75只6周齡雄性ApoE^-/-小鼠隨機分為:對照組(普食+尾靜脈注射生理鹽水,n=15)、模型組(高脂飲食+尾靜脈注射生理鹽水,n=15)、CML組(高脂飲食+尾靜脈注射CML 10mg/kg/day,n=15)、AAV-shscramble組(高脂飲食+尾靜脈注射CML 10mg/kg/day+AAV-shscramble,n=15)、AAV-shRAGE組(高脂飲食+尾靜脈注射CML 10mg/kg/day+AAV-shRAGE,n=15)連續(xù)飼喂16周。在4、8、16周分別進(jìn)行肝臟、主動脈形態(tài)學(xué)觀察(HE、油紅O、Masson染色);檢測相關(guān)生化指標(biāo)包括:總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)以及分子生物學(xué)檢測。結(jié)果(1)肝臟HE染色顯示:實驗4周模型組肝細(xì)胞氣球樣變性,CML干預(yù)后肝細(xì)胞氣球樣變性加重;主動脈...

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要1
abstract1
摘要2
abstract2
英文簡寫詞索引
第一部分 CML/RAGE信號在動脈粥樣硬化與非酒精性脂肪肝進(jìn)展中的影響
    前言
    1 實驗材料
        1.1 實驗動物及飼料
        1.2 試劑及配制
        1.3 主要儀器
    2 實驗方法
        2.1 實驗動物及分組
        2.2 ApoE^-/-小鼠血清學(xué)檢測
        2.3 實驗標(biāo)本及切片制備
            2.3.1 制備石蠟切片
            2.3.2 冰凍切片制備過程
        2.4 蘇木素-伊紅染色法(HE染色)
        2.5 組織油紅O染色
        2.6 免疫組織化學(xué)染色
        2.7 馬松染色(Masson)
        2.8 實時熒光定量PCR檢測(RT-PCR)
            2.8.1 組織RNA的提取
            2.8.2 RNA純度、濃度檢測
            2.8.3 逆轉(zhuǎn)錄為c DNA
            2.8.4 實時熒光定量PCR擴增目的基因
            2.8.5 Real-Time PCR數(shù)據(jù)分析
    3 統(tǒng)計學(xué)處理
    4 結(jié)果
        4.1 CML促進(jìn)ApoE^-/-小鼠肝臟脂肪變性
        4.2 CML促進(jìn)ApoE^-/-小鼠血管內(nèi)斑塊形成
        4.3 CML促進(jìn)ApoE^-/-小鼠肝臟和血管中促炎細(xì)胞因子的表達(dá)
        4.4 CML通過上調(diào)其受體RAGE促進(jìn)促炎細(xì)胞因子的表達(dá)
    5 討論
第二部分 PPARγ在CML/RAGE介導(dǎo)Apo E^-/-小鼠動脈粥樣硬化和非酒精性脂肪肝的作用研究
    前言
    1 實驗材料
        1.1 實驗細(xì)胞株
        1.2 實驗動物
        1.3 試劑及配制
        1.4 主要儀器
    2 實驗方法
        2.1 實驗動物及分組
        2.2 ApoE^-/-小鼠血清學(xué)檢測
        2.3 實驗標(biāo)本的留取與切片制備
            2.3.1 制備石蠟切片
            2.3.2 冰凍切片制備過程
        2.4 蘇木素-伊紅染色(HE染色)
        2.5 細(xì)胞油紅O染色及萃取
            2.5.1 油紅O染色
            2.5.2油紅萃取實驗
        2.6 細(xì)胞培養(yǎng)與實驗分組
        2.7 MTT法測定CML對細(xì)胞活性的影響
        2.8 RAGE siRNA轉(zhuǎn)染
        2.9 RAGE siRNA干擾效率驗證
        2.10 ELISA檢測
        2.11 蛋白免疫印跡分析(Western blot)
            2.11.1 提取細(xì)胞蛋白
            2.11.2 檢測蛋白濃度(BCA法)
            2.11.3 SDS-PAGE凝膠配制
            2.11.4 上樣及SDS-PAGE電泳
            2.11.5 轉(zhuǎn)膜
            2.11.6 封閉
            2.11.7 抗體孵育和曝光
        2.12 實時PCR檢測(RT-PCR)
            2.12.1 細(xì)胞RNA的提取
            2.12.2 RNA純度、濃度檢測
            2.12.3 逆轉(zhuǎn)錄
            2.12.4 實時熒光定量PCR擴增目的基因
            2.12.5 Real-Time PCR數(shù)據(jù)分析
    3 統(tǒng)計學(xué)分析
    4 結(jié)果
        4.1 吡格列酮緩解CML刺激下ApoE^-/-小鼠非酒精性肝臟脂肪變性
        4.2 吡格列酮改善CML刺激下Apo E^-/-小鼠脂質(zhì)紊亂、肝損以及氧化損傷
        4.3 吡格列酮抑制CML誘導(dǎo)ApoE^-/-小鼠動脈粥樣硬化的形成
        4.4 MTT法檢測CML對 HepG2 細(xì)胞活性的影響
        4.5 CML抑制HepG2 細(xì)胞內(nèi)PPARγ表達(dá)
        4.6 CML通過上調(diào)RAGE抑制HepG2 細(xì)胞內(nèi)PPARγ表達(dá)
        4.7 激動PPARγ下調(diào)RAGE抑制促炎性細(xì)胞因子的表達(dá)
        4.8 激動PPARγ抑制CML/RAGE介導(dǎo)的內(nèi)皮損傷
    5 討論
第三部分 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
致謝
碩士期間發(fā)表論文情況
碩士期間參加的學(xué)術(shù)活動



本文編號：3853136