目的:探究PSGL-1通過炎癥反應(yīng)在小鼠鹽敏感性高血壓發(fā)生發(fā)展中的作用及分子機制。方法:體內(nèi)實驗:將PSGL-1基因敲除(PSGL-1-/-)小鼠及其野生型(PSGL-1+/+)小鼠,分別給予高鹽(6%NaCl)和正常鹽(0.4%NaCl)喂養(yǎng)三個月,麻醉狀態(tài)下頸總動脈插管測量小鼠血壓,利用流式細胞術(shù)、免疫組化、免疫熒光、Elisa和免疫印跡方法檢測小鼠組織中炎癥反應(yīng)、血管功能和腎臟損傷情況;體外實驗一:分別提取PSGL-1+/+和PSGL-1-/-小鼠的外周血單個核細胞(PBMC),并用BCECF-AM探針染色。小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞單層分別給予130 mM和170 mM NaCl刺激三小時后,加入探針標(biāo)記的PBMC細胞共孵育三十分鐘,用倒置熒光顯微鏡拍照對比各組熒光強度,即代表PBMC粘附數(shù)量;體外實驗二:提取小鼠外周血單個核細胞,分別在130 mM和170 mMNaCl濃度環(huán)境中與小鼠P-selectin重組蛋白共孵育,用流式細胞術(shù)檢測與P-selectin重組蛋白結(jié)合的外周血單個核細胞的比例;體外實驗三:將小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞(Bend.3)分別于130mMNaCl、170mM ...

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中英文縮略詞
第一部分 PSGL-1參與高鹽引起的血管內(nèi)皮損傷和靶器官損傷
    摘要
    Abstract
    引言
    材料和方法
        1.實驗材料
            1.1 實驗細胞及實驗動物
            1.2 主要實驗儀器
            1.3 主要抗體及試劑
            1.4 主要試劑的配制
        2.實驗方法
            2.1 頸動脈插管法檢測小鼠動脈血壓[45]
            2.2 血管功能檢測
            2.3 免疫熒光法
            2.4 Elisa方法檢測外周血血清中內(nèi)皮素-1(ET-1)的表達量
            2.5 流式細胞術(shù)
            2.6 小鼠外周血單個核細胞(PBMC)—小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞(Bend.3)單層體外粘附作用
            2.7 免疫組化方法檢測小鼠皮膚小血管和腹主動脈中炎癥細胞浸潤的檢測
            2.8 免疫印跡法檢測蛋白質(zhì)表達水平
            2.9 細胞培養(yǎng)
        3.統(tǒng)計學(xué)分析
    實驗結(jié)果
        1.PSGL-1參與高鹽誘導(dǎo)的白細胞浸潤
            1.1 PSGL-1參與高鹽誘導(dǎo)的皮膚小血管炎癥細胞的浸潤
            1.2 PSGL-1參與高鹽誘導(dǎo)的小鼠外周血單個核細胞(PBMC)-小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞(Bend.3)的體外粘附
            1.3 高鹽促進白細胞表面的PSGL-1與P-selectin的結(jié)合
        2.PSGL-1對血管炎癥和血管功能的影響
            2.1 PSGL-1參與高鹽誘導(dǎo)的炎癥細胞在主動脈中的浸潤
            2.2 PSGL-1影響血管內(nèi)皮eNOS的表達
            2.3 PSGL-1影響高鹽誘導(dǎo)的內(nèi)皮素-1的表達
            2.4 PSGL-1缺失抑制高鹽飲食誘導(dǎo)的血管舒張功能的下降
        3.PSGL-1缺失抑制腎臟炎癥反應(yīng)和腎臟損傷
            3.1 PSGL-1參與高鹽誘導(dǎo)的腎臟炎癥細胞浸潤
            3.2 PSGL-1參與高鹽誘導(dǎo)的腎臟氧化應(yīng)激和纖維化
        4.高鹽通過NF-κB信號通路促進小鼠腦微血管內(nèi)皮細胞表面的粘附分子表達
    討論
    小結(jié)
第二部分 MiR-122通過TGFβ1/TGFβR1通路調(diào)控血管內(nèi)皮EndMT的發(fā)生
    摘要
    Abstract
    引言
    材料與方法
        1.實驗材料
            1.1 細胞與實驗動物
            1.2 實驗儀器
            1.3 實驗試劑
        2.實驗方法
            2.1 HE染色
            2.2 細胞培養(yǎng)
            2.3 細胞轉(zhuǎn)染
            2.4 油紅O染色
            2.5 RNA提取
            2.6 RT-PCR
            2.7 Real-time PCR
            2.8 免疫印跡法檢測蛋白質(zhì)表達水平
        3.統(tǒng)計學(xué)分析
    實驗結(jié)果
        1.高脂飲食誘導(dǎo)的動脈粥樣硬化小鼠中miR-122的表達
        2.血管內(nèi)皮細胞發(fā)生EndMT過程中miR-122表達水平的變化
        3.MiR-122影響EndMT的發(fā)生
        4.MiR-122抑制H₂O₂誘導(dǎo)的EndMT
        5.MiR-122在不同種屬中對TGFβ1/TGFβR1信號通路的調(diào)控差異性
    討論
    小結(jié)
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
個人簡歷
致謝



本文編號：3810348