發(fā)布時間：2023-04-16 20:56

　　目的本實驗主要在細胞水平上研究親環(huán)蛋白A是否通過AKT/Nox2信號通路調控大鼠心肌細胞H9c2在缺氧/復氧條件下誘導的凋亡。方法在體外培養(yǎng)大鼠心肌細胞H9c2,通過蛋白質印跡法(Western blot)檢測β-actin、BAX、Bcl-2、Caspase-3、Nox1、Nox2、Nox4、AKT、p-AKT-Ser473的蛋白表達量;使用流式細胞術(Flow Cytometry,FCM)和TUNEL試劑盒檢測H9c2細胞的凋亡率;通過二氫乙錠(Dihydroethidium,DHE)染色和電子自旋共振波譜儀(Electron Spin Resonance,ESR)測定H9c2細胞中活性氧自由基(Reactive oxygen species,ROS)和依賴于煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶的O2-的含量。應用AKT抑制劑和NADPH氧化酶2(NADPH oxidase 2,Nox2)抑制劑分別抑制AKT蛋白和Nox2蛋白的表達水平及其活性,并同時檢測凋亡蛋白和抗凋亡...

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
縮略詞表
第一章 緒論
    1.1 研究背景
    1.2 本研究的目的、內容
第二章 親環(huán)蛋白A通過AKT/Nox2 信號通路調控心肌細胞在缺氧/復氧誘導下的凋亡
    2.1 材料
        2.1.1 主要儀器
        2.1.2 主要試劑及耗材
        2.1.3 緩沖液及其他溶液
    2.2 方法
        2.2.1 細胞培養(yǎng)
        2.2.2 分組及細胞處理
        2.2.3 提細胞蛋白和 Western blot
        2.2.4 流式細胞術
        2.2.5 TUNEL
        2.2.6 DHE熒光探針
        2.2.7 電子自旋共振
        2.2.8 共聚焦顯微鏡
        2.2.9 統(tǒng)計學分析
    2.3 結果
        2.3.1 細胞外的 CyPA 抑制了在缺氧/復氧條件下 H9c2 細胞的凋亡
        2.3.2 細胞外的 CyPA 降低了缺氧/復氧條件下 H9c2 細胞中 O2
-的產量
        2.3.3 AKT/Nox2 信號通路對CyPA在逆轉缺氧/復氧誘導的細胞凋亡中的作用
        2.3.4 在缺氧/復氧的條件下，抑制 AKT/Nox2 信號通路部分地消除了CyPA介導的保護作用
        2.3.5 親環(huán)蛋白A對缺氧/復氧條件下H9c2中Nox2 膜結合亞基的表達的影響
        2.3.6 機制示意圖
    2.4 討論
第三章 結論
參考文獻
綜述
    參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文
致謝



本文編號：3791858

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