目的:利用肺炎衣原體（Chlamdia pneumoniae,C.pneumoniae）體外感染血管內(nèi)皮細(xì)胞（vascular endothelial cell,VEC）模型,觀察 C.pneumoniae 感染對(duì) VEC 遷移和血管新生的影響;探討IQGAP1-N-WASP信號(hào)通路在C.pneumoniae感染誘導(dǎo)VEC遷移和血管新生中的作用。方法:1.C.pneumoniae增殖培養(yǎng)后體外感染VEC;2.采用Western blot技術(shù)檢測(cè)C.pneumoniae感染的VEC內(nèi)IQGAP1蛋白的表達(dá)水平;3.免疫共沉淀法檢測(cè)C.pneumoniae感染后IQGAP1的磷酸化水平;4.CCK-8 檢測(cè) Src抑制劑 PP2 以及 PKC 抑制劑 GF 109203X 和 chelerythrine 在使用濃度及作用時(shí)間內(nèi)對(duì)VEC活力的影響;5.免疫熒光法確定PP2、GF109203X以及chelerythrine在使用濃度及作用時(shí)間內(nèi)對(duì)C.pneumoniae感染率的影響;6.分別用PP2、GF 109203X和chelerythrine預(yù)處理后,免疫共沉淀法檢測(cè)C.pneumoni... 

【文章頁(yè)數(shù)】：124 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語(yǔ)
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、C.pneumoniae感染對(duì)IQGAP1活性的影響
    實(shí)驗(yàn)一 C.pneumoniae感染對(duì)IQGAP1活性的影響
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
            1.1.1 細(xì)胞
            1.1.2 菌株
            1.1.3 主要試劑
            1.1.4 主要儀器
            1.1.5 主要試劑的配制
        1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            1.2.1 VEC的培養(yǎng)、復(fù)蘇、傳代與凍存
            1.2.2 C.pneumoniae的增殖培養(yǎng)
            1.2.3 C.pneumoniae感染VEC
            1.2.4 Western blot分析C.pneumoniae感染后VEC IQGAP1內(nèi)表達(dá)水平
            1.2.5 免疫共沉淀分析C.pneumoniae感染后VEC IQGAP1的磷酸化水平
            1.2.6. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
        1.3 結(jié)果
            1.3.1. C.pneumoniae感染對(duì)VEC IQGAP1蛋白表達(dá)水平的影響
            1.3.2. C.pneumoniae感染可誘導(dǎo)VEC IQGAP1酪氨酸磷酸化
            1.3.3. C.pneumoniae感染促進(jìn)VEC IQGAP1絲氨酸磷酸化
    實(shí)驗(yàn)二 Src、PKC在C.pneumoniae感染激活I(lǐng)QGAP1中的作用
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
            2.1.1. 細(xì)胞
            2.1.2 菌株
            2.1.3 主要試劑
            2.1.4 主要儀器
            2.1.5 主要試劑的配制
        2.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.2.1. C.pneumoniae感染VEC
            2.2.2. CCK-8檢測(cè)PP2、GF 109203X和chelerythrine對(duì)VEC活力的影響
            2.2.3. 免疫共沉淀法檢測(cè)PP2對(duì)C.pneumoniae感染誘導(dǎo)的VEC IQGAP1酪氨酸磷酸化的影響
            2.2.4. 免疫共沉淀法檢測(cè)GF 109203X和chelerythrine對(duì)C.pneumoniae感染誘導(dǎo)VEC IQGAP1絲氨酸磷酸化的影響
            2.2.5. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
        2.3 結(jié)果
            2.3.1. PP2、GF 109203X和chelerythrine對(duì)VEC活力的影響
            2.3.2. PP2可抑制C.pneumoniae感染誘導(dǎo)的IQGAP1酪氨酸磷酸化
            2.3.3. GF 109203X和chelerythrine均可抑制C.pneumoniae感染誘導(dǎo)的VEC IQGAP1絲氨酸磷酸化
二、IQGAP1在C.pneunioniae感染誘導(dǎo)的VEC遷移和血管新生中的作用
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1. 細(xì)胞
        1 2. 菌株
        1.3. 主要試劑
        1.4. 主要儀器
        1.5. 主要試劑的配制
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1. C.pneumoniae感染VEC
        2.2. RNA干擾
        2.3 免疫熒光法觀察PP2、GF 109203X以及chelerythrine對(duì)C.pneumoniae感染率的影響
        2.4. 實(shí)驗(yàn)分組
        2.5. Wound healing實(shí)驗(yàn)
        2.6. Transwell實(shí)驗(yàn)
        2.7. 微管腔形成實(shí)驗(yàn)
        2.8. 肌動(dòng)蛋白聚合實(shí)驗(yàn)
        2.9. 免疫熒光雙標(biāo)染色
        2.10. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3. 結(jié)果
        3.1. RNA干擾效能達(dá)到實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)
        3.2. 免疫熒光法確定PP2、GF 109203X以及chelerythrine對(duì)C.pneumoniae感染率的影響
        3.3. Wound healing實(shí)驗(yàn)觀察IQGAP1在C.pneumoniae感染誘導(dǎo)的VEC遷移中的作用
        3.4. Transwell實(shí)驗(yàn)觀察IQGAP1在C.pneumoniae感染誘導(dǎo)的VEC遷移中的作用
        3.5. 微管腔形成實(shí)驗(yàn)觀察IQGAP1在C.pneumoniae感染誘導(dǎo)的VEC血管新生中的作用
        3.6. 激光掃描共聚焦顯微鏡觀察C.pneumoniae感染對(duì)VEC肌動(dòng)蛋白聚合的影響
        3.7. 免疫熒光雙標(biāo)染色法觀察C.pneumoniae感染VEC后IQGAP1和肌絲的共定位
三、IQGAP1通過(guò)N-WASP調(diào)控C.pneumoniae感染誘導(dǎo)的VEC遷移和血管新生
    1. 實(shí)驗(yàn)材料
        1.1. 細(xì)胞
        1.2. 菌株
        1.3. 主要試劑
        1.4. 主要儀器
        1.5. 主要試劑的配制
    2. 實(shí)驗(yàn)方法
        2.1. C.pneumoniae感染VEC
        2.2. 實(shí)驗(yàn)分組
        2.3. 免疫共沉淀觀察IQGAP1與N-WASP之間的相互作用
        2.4. 共聚焦顯微鏡觀察IQGAP1對(duì)C.pneumoniae感染誘導(dǎo)VEC肌動(dòng)蛋白和N-WASP共定位的影響
        2.5. Western blot檢測(cè)IQGAP1對(duì)C.pneumoniae感染誘導(dǎo)的N-WASP磷酸化水平的影響
        2.6. 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    3. 結(jié)果
        3.1. IQGAP1與N-WASP之間的相互作用
        3.2. IQGAP1對(duì)C.pneumoniae感染誘導(dǎo)VEC肌絲和N-WASP共定位的影響
        3.3. IQGAP1對(duì)C.pneumoniae感染誘導(dǎo)的VEC N-WASP磷酸化的影響
討論
小結(jié)
結(jié)論
論文創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說(shuō)明
附錄
綜述 IQGAP1在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展中的作用研究進(jìn)展
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]肺炎衣原體感染通過(guò)PI3K通路誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移[J]. 權(quán)偉,張利軍,陳寧,沈炳玲,葉靜,王蓓蓓,劉欣,張麗莙.  中國(guó)病理生理雜志. 2010(07)
[2]Atherosclerosis,inflammation and Chlamydia pneumoniae[J]. Giovanni Fazio,Maria Giovino,Alessandro Gullotti,Daniela Bacarella,Giuseppina Novo,Salvatore Novo.  World Journal of Cardiology. 2009(01)
[3]黃連素通過(guò)PI3K抑制肺炎衣原體感染誘導(dǎo)的血管內(nèi)皮細(xì)胞遷移[J]. 權(quán)偉,張利軍,陳寧,王蓓蓓,張麗莙.  中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志. 2009(11)

碩士論文
[1]肺炎衣原體感染通過(guò)激活Racl誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞遷移[D]. 張俊霞.天津醫(yī)科大學(xué) 2013



本文編號(hào)：3703543