發(fā)布時間：2022-06-03 21:55

　　目的:探討由Kv1.3通道基因介導的Treg細胞活化與心肌成纖維（CFs）細胞間的相互作用關系,明確Kv1.3通道基因在Treg細胞活化并促進心肌纖維化過程中的關鍵地位。方法通過基因工程方法構建靶向RNA干擾（RNAi）KCNA3（Kv1.3）基因的慢病毒載體,體外轉染Treg細胞后與CFs共培養(yǎng),RT-qPCR法和全細胞膜片鉗法檢測轉染Treg細胞基因沉默效率;ELISA法檢測共培養(yǎng)細胞分泌因子的變化;CCK-8法檢測共培養(yǎng)體系細胞的增殖變化;In cell western法檢測共培養(yǎng)體系Treg細胞上的Kv1.3通道蛋白的表達。結果:1.成功構建基因干擾的慢病毒載體并轉染Treg細胞:與正常組相比,沉默組Treg細胞Kv1.3 mRNA表達明顯降低（P<0.01）,抑制率為78.0%;與正常組相比,沉默組Treg細胞Kv1.3鉀通道+40mV的峰值電流密度明顯降低（P<0.01）,其抑制率為71.3%;2.CCK-8實驗表明:CFs+Tregs組較CFs組增殖最明顯（P<0.01）;CFs+Tregs+EPL組較CFs+Tregs組增殖明顯降低（P<0.01... 

【文章頁數(shù)】：61 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
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摘要
ABSTRACT
前言
研究內容與方法
    1 研究對象
        1.1 CD4~+CD25~+Treg細胞
        1.2 共培養(yǎng)體系纖維化研究
    2 實驗儀器與設備
        2.1 儀器和設備
        2.2 藥品與試劑
    3 相關實驗試劑配置
        3.1 PBS緩沖液的配置
        3.2 細胞因子(IL-2,TGF-β)溶解稀釋
        3.3 完全培養(yǎng)基的配置
        3.4 免疫磁珠分選緩沖溶液配置
        3.5 全細胞膜片鉗記錄Kv1.3鉀離子通道電流相關溶液配置
        3.6 依普利酮的配置
        3.7 轉染試劑稀釋及配置
        3.8 In Cell Western實驗相關試劑的配置
    4 實驗方法
        4.1 CD4~+CD25~+Treg細胞
        4.2 CD4~+CD25~+Treg細胞體外刺激活化
        4.3 使用慢病毒系統(tǒng)包裝Kv1.3基因轉染目的細胞
        4.4 實時定量PCR檢測目的細胞Kv1.3通道基因m RNA
        4.5 全細胞膜片鉗檢測正常組及轉染組電流密度
        4.6 SD大鼠乳鼠CFs的分選
        4.7 構建Treg細胞與CF細胞體外共培養(yǎng)模型
    5 統(tǒng)計方法
    6 技術路線圖
結果
討論
小結
致謝
參考文獻
綜述 心肌纖維化的發(fā)病機制與研究進展
    參考文獻
攻讀碩士學位期間發(fā)表的學術論文
導師評閱表


【參考文獻】：
期刊論文
[1]CD4+CD25highCD127low調節(jié)性T細胞促進上皮性卵巢癌轉移機制的初步探討[J]. 柯星,張良,沈立松.  檢驗醫(yī)學. 2019(02)
[2]siRNA藥物研究進展[J]. 賀婉紅,薛嫚,李芳,俸靈林,張婷.  中國藥學雜志. 2018(14)
[3]依普利酮基于阻斷Kv1.3通道對抗Treg細胞體外促成纖維細胞增殖作用[J]. 邵培培,徐琦,李少華,程路峰.  中國藥理學通報. 2017(11)
[4]細胞共培養(yǎng)模型及其在中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病研究中的應用[J]. 楊盛,何然,張飛燕,薛強,徐曉玉.  藥學學報. 2016(03)
[5]炎癥免疫反應軟調節(jié)[J]. 魏偉.  中國藥理學通報. 2016(03)
[6]慢性心衰大鼠CD4+ CD25+ Treg細胞Kv1.3鉀通道電流變化[J]. 劉長江,武洋,李少華,邵培培,程路峰.  新疆醫(yī)科大學學報. 2016(02)
[7]心肌纖維化的發(fā)病機制及其研究進展[J]. 于瑞,王幼平,崔琳,李彬,謝世陽,高原,王新陸,朱明軍.  中國現(xiàn)代醫(yī)生. 2015(13)
[8]心肌纖維化發(fā)病機制及治療進展[J]. 宋秉春,張金國.  濟寧醫(yī)學院學報. 2015(01)
[9]參附注射液治療慢性心力衰竭研究進展[J]. 侯鵬高,呂長淮.  齊齊哈爾醫(yī)學院學報. 2014(08)
[10]轉化生長因子β1與心肌纖維化的研究進展[J]. 楊錦龍,范忠才.  醫(yī)學理論與實踐. 2014(08)



本文編號：3653549