氧化型低密度脂蛋白通過腎素(前體)受體介導(dǎo)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞遷移及其機(jī)制的研究
發(fā)布時(shí)間:2022-02-15 03:21
腎素(前體)受體(renin/prorenin receptor, PRR)是腎素與腎素前體的共同受體,于2002年被首次發(fā)現(xiàn)。當(dāng)腎素(前體)受體與其配體結(jié)合后,可以增強(qiáng)腎素及腎素前體的酶學(xué)激活,促進(jìn)血管緊張素II(Angiotensin II,AngII)的產(chǎn)生,從而增強(qiáng)腎素-血管緊張素系統(tǒng)的活性,發(fā)揮升高血壓、致炎、致動(dòng)脈粥樣硬化的作用。但近年的研究發(fā)現(xiàn),腎素(前體)受體可以以一種非血管緊張素II依賴的方式被激活,從而觸發(fā)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制,發(fā)揮致炎、致動(dòng)脈粥樣硬化(Atherosclerosis,AS)的作用。高腎素(前體)可通過腎素(前體)受體,促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞、足細(xì)胞炎癥因子的表達(dá)及細(xì)胞增殖。血管平滑肌細(xì)胞(Vascular Smooth Muscle Cells, VSMCs)主要位于血管中層,在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)病過程中亦發(fā)揮重要作用。如在致動(dòng)脈粥樣硬化條件下,可以由血管中層遷移至內(nèi)皮下層,并進(jìn)一步增殖,促進(jìn)粥樣硬化斑塊纖維帽的形成;細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化為分泌型,促進(jìn)炎癥因子的釋放,吸引炎性細(xì)胞的浸潤(rùn),促進(jìn)泡沫細(xì)胞的形成;同時(shí),發(fā)生凋亡異常,導(dǎo)致凋亡/增殖比例失調(diào),促進(jìn)斑塊的形成。上...
【文章來源】:大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁(yè)數(shù)】:103 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
【文章目錄】:
摘要
Abstract
前言
第一部分 氧化型低密度脂蛋白在人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞對(duì)腎素(前體)受體表達(dá)的影響
材料和方法
一. 材料及試劑
(一) 主要試劑
(二)標(biāo)本來源及用液配制
(三) 主要器材
二. 實(shí)驗(yàn)方法
(一) 人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)及處理
(二) 細(xì)胞免疫熒光
(三) 干預(yù)實(shí)驗(yàn)
(四) 實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄 PCR
(五) Western Blot
三.統(tǒng)計(jì)分析
結(jié)果
一. 細(xì)胞培養(yǎng)
二. 免疫熒光染色
三.氧化型低密度脂蛋白作用于人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞不同時(shí)間,對(duì)腎素(前體)受體的影響
四.不同濃度的氧化型低密度脂蛋白作用于人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 對(duì)腎素(前體)受體的影響
第二部分 氧化型低密度蛋白通過上調(diào)腎素(前體)受體介導(dǎo)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的遷移
材料與方法
一.材料和方法
(一) 主要試劑
(二) 標(biāo)本來源及用液配制
(三) 主要器材
二. 實(shí)驗(yàn)方法
(一) 人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)、處理及分組
(二) 小 RNA 干擾實(shí)驗(yàn)
(三) 實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄 PCR
(四) Western Blot
(五) 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
三.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
一. 腎素(前體)受體干擾效率的檢測(cè)
二. 氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的遷移
三. 腎素(前體)受體對(duì)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞遷移的影響
四. 磷酸化 p38 促分裂原活化蛋白激酶的表達(dá)
第三部分 1 小時(shí)內(nèi)氧化型低密度脂蛋白在人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞對(duì)腎素(前體)受體表達(dá)及對(duì)該細(xì)胞遷移的影響(補(bǔ)充實(shí)驗(yàn))
材料和方法
一. 材料與方法
(一) 主要試劑
(二) 標(biāo)本來源及用液配制
(三) 主要器材
二. 實(shí)驗(yàn)方法
(一)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)、處理及分組
(二) 蛋白質(zhì)免疫印跡
(三) 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
三.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
一. 一時(shí)內(nèi)各時(shí)間點(diǎn),50 μg/ml 的氧化型低密度脂蛋白在人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中,對(duì)腎素(前體)受體表達(dá)的影響…48
二. 50 μg/ml 的氧化型低密度脂蛋白作用于人動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 20 分鐘后,對(duì) p38MAPK 通路磷酸化程度的影響…49
三. p38MAPK 信號(hào)傳導(dǎo)通路阻斷對(duì)氧化型低密度脂蛋白介導(dǎo)的人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞遷移的影響
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
參考文獻(xiàn)
縮略語(yǔ)表
攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況
致謝
本文編號(hào):3625812
【文章來源】:大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁(yè)數(shù)】:103 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:博士
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摘要
Abstract
前言
第一部分 氧化型低密度脂蛋白在人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞對(duì)腎素(前體)受體表達(dá)的影響
材料和方法
一. 材料及試劑
(一) 主要試劑
(二)標(biāo)本來源及用液配制
(三) 主要器材
二. 實(shí)驗(yàn)方法
(一) 人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)及處理
(二) 細(xì)胞免疫熒光
(三) 干預(yù)實(shí)驗(yàn)
(四) 實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄 PCR
(五) Western Blot
三.統(tǒng)計(jì)分析
結(jié)果
一. 細(xì)胞培養(yǎng)
二. 免疫熒光染色
三.氧化型低密度脂蛋白作用于人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞不同時(shí)間,對(duì)腎素(前體)受體的影響
四.不同濃度的氧化型低密度脂蛋白作用于人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 對(duì)腎素(前體)受體的影響
第二部分 氧化型低密度蛋白通過上調(diào)腎素(前體)受體介導(dǎo)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的遷移
材料與方法
一.材料和方法
(一) 主要試劑
(二) 標(biāo)本來源及用液配制
(三) 主要器材
二. 實(shí)驗(yàn)方法
(一) 人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)、處理及分組
(二) 小 RNA 干擾實(shí)驗(yàn)
(三) 實(shí)時(shí)定量反轉(zhuǎn)錄 PCR
(四) Western Blot
(五) 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
三.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
一. 腎素(前體)受體干擾效率的檢測(cè)
二. 氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的遷移
三. 腎素(前體)受體對(duì)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞遷移的影響
四. 磷酸化 p38 促分裂原活化蛋白激酶的表達(dá)
第三部分 1 小時(shí)內(nèi)氧化型低密度脂蛋白在人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞對(duì)腎素(前體)受體表達(dá)及對(duì)該細(xì)胞遷移的影響(補(bǔ)充實(shí)驗(yàn))
材料和方法
一. 材料與方法
(一) 主要試劑
(二) 標(biāo)本來源及用液配制
(三) 主要器材
二. 實(shí)驗(yàn)方法
(一)人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)、處理及分組
(二) 蛋白質(zhì)免疫印跡
(三) 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)
三.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
結(jié)果
一. 一時(shí)內(nèi)各時(shí)間點(diǎn),50 μg/ml 的氧化型低密度脂蛋白在人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞中,對(duì)腎素(前體)受體表達(dá)的影響…48
二. 50 μg/ml 的氧化型低密度脂蛋白作用于人動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞 20 分鐘后,對(duì) p38MAPK 通路磷酸化程度的影響…49
三. p38MAPK 信號(hào)傳導(dǎo)通路阻斷對(duì)氧化型低密度脂蛋白介導(dǎo)的人主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞遷移的影響
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
參考文獻(xiàn)
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致謝
本文編號(hào):3625812
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