背景:多種心臟疾病可以引起心力衰竭,心力衰竭是世界范圍內(nèi)引起死亡的主要原因之一。外界刺激可以使心臟發(fā)生生理性肥大反應(yīng)或病理性肥大反應(yīng)(又稱為生理性重塑或病理性重塑)。生理性肥大是可逆的,有助于維持正常的心臟功能。生理性肥大主要表現(xiàn)為心肌細(xì)胞的適應(yīng)性生長(zhǎng),伴隨著心肌肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶(SERCA2a)等有益蛋白表達(dá)上調(diào)以及血管生成增加,且不會(huì)出現(xiàn)ANP、ACTC以及Myh7等胎兒基因的激活和心肌纖維化。然而,病理性肥大是不可逆的,可以使心臟功能惡化并最終引起心力衰竭。病理性肥大主要表現(xiàn)為心肌細(xì)胞的非適應(yīng)性生長(zhǎng)、凋亡增加并伴隨有胎兒基因激活和心肌纖維化。在許多心臟疾病的早期,心肌生理性肥大及病理性肥大同時(shí)存在。因此,研究影響心臟有益和有害兩種肥大的影響因素和機(jī)制對(duì)于治療多種心臟疾病,預(yù)防心力衰竭具有重要意義。BAG3是一種在心臟、骨骼肌和一些腫瘤中高表達(dá)的蛋白質(zhì),可以調(diào)控包括發(fā)育、凋亡、自噬以及腫瘤發(fā)生發(fā)展等多個(gè)生物學(xué)過程。越來越多的研究表明BAG3在心臟中也具有重要作用,它可以促進(jìn)心肌中異常折疊蛋白質(zhì)及受損細(xì)胞器的降解、抑制心肌細(xì)胞凋亡、維持心肌Z-盤的結(jié)構(gòu)完整性、調(diào)節(jié)心肌收縮力以...

【文章來源】： 中國醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：106 頁

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
第一部分 :BAG3在心肌生理性肥大和心肌病理性肥大中的作用及機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 心臟特異性BAG3純合與雜合鼠的構(gòu)建
        2.2 小鼠游泳訓(xùn)練
        2.3 小鼠皮下埋泵(持續(xù)泵入苯腎上腺素)
        2.4 超聲心動(dòng)圖
        2.5 蘇木素-伊紅(H&E)染色
        2.6 Masson染色
        2.7 原代心肌細(xì)胞分離、培養(yǎng)及處理
            2.7.1 原代心肌細(xì)胞分離與純化
            2.7.2 原代心肌細(xì)胞的接種與培養(yǎng)
            2.7.3 原代心肌細(xì)胞處理
        2.8 原代心肌細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.9 細(xì)胞核組分與細(xì)胞漿組分的分離
        2.10 Western blot
            2.10.1 總蛋白提取
            2.10.2 蛋白定量
            2.10.3 蛋白配置及準(zhǔn)備
            2.10.4 SDS-PAGE電泳及轉(zhuǎn)膜
            2.10.5 封閉及抗體孵育
            2.10.6 發(fā)光
            2.10.7 使用到的抗體
        2.11 免疫熒光
        2.12 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        2.13 常用試劑配置、使用儀器及耗材清單
    3 結(jié)果
        3.1 心肌細(xì)胞生理性肥大和病理性肥大的表現(xiàn)
        3.2 小鼠心臟生理性肥大和病理性肥大的表現(xiàn)
        3.3 BAG3的表達(dá)在體內(nèi)和體外的生理性肥大與病理性肥大中上調(diào)
        3.4 心臟特異性BAG3純合與雜合敲除鼠的構(gòu)建
        3.5 心臟特異性BAG3純合與雜合敲除鼠的心臟表現(xiàn)特點(diǎn)
        3.6 BAG3可以在體外促進(jìn)心肌生理性肥大
        3.7 BAG3可以在體內(nèi)促進(jìn)心肌生理性肥大
        3.8 BAG3可以在體外抑制心肌病理性肥大
        3.9 BAG3可以在體內(nèi)抑制心肌病理性肥大
        3.10 BAG3 通過Akt-mTOR通路介導(dǎo)心肌生理性肥大
        3.11 BAG3 通過calcineurin-NFAT通路抑制心肌病理性肥大
    4 討論
    5 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 :MALAT1在心肌生理性肥大和心肌病理性肥大中的作用及機(jī)制研究
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與處理
        2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.3 實(shí)時(shí)定量PCR(qRT-PCR)
            2.3.1 提取總RNA
            2.3.2 RNA濃度及純度測(cè)定
            2.3.3 逆轉(zhuǎn)錄
            2.3.4 實(shí)時(shí)定量PCR
        2.4 Western blot
            2.4.1 總蛋白提取
            2.4.2 蛋白定量
            2.4.3 蛋白配置及準(zhǔn)備
            2.4.4 SDS-PAGE電泳及轉(zhuǎn)膜
            2.4.5 封閉及抗體孵育
            2.4.6 發(fā)光
            2.4.7 使用到的抗體
        2.5 熒光素酶報(bào)告基因
        2.6 數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
        2.7 常用試劑配置
    3 結(jié)果
        3.1 MALAT1的表達(dá)在生理性肥大和病理性肥大的細(xì)胞中升高
        3.2 敲減MALAT1抑制了心肌病理性肥大,而對(duì)生理性肥大無明顯作用
        3.3 MALAT1與microRNA-26a之間的相互作用
        3.4 敲減MALAT1 通過mi R-26a抑制了GATA4 蛋白的表達(dá)
        3.5 MALAT1對(duì)PE誘導(dǎo)的心肌病理性肥大的影響是通過mi R-26a介導(dǎo)的
    4 討論
    5 結(jié)論
    參考文獻(xiàn)
本研究的創(chuàng)新性自我評(píng)價(jià)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Pro?ling and Validation of the Circular RNA Repertoire in Adult Murine Hearts [J]. Tobias Jakobi,Lisa F.Czaja-Hasse,Richard Reinhardt,Christoph Dieterich.  Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2016(04)



本文編號(hào)：3548830