發(fā)布時(shí)間：2021-11-06 14:48

　　目的冠狀動(dòng)脈粥樣硬化是冠心病的發(fā)病基礎(chǔ),高血脂作為重要的環(huán)境因素,通過引起冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生。低密度脂蛋白（ox-LDL）對(duì)冠脈內(nèi)皮的損傷發(fā)生貫穿于冠心病的發(fā)病整個(gè)過程中,最終導(dǎo)致心梗的發(fā)生。減少和預(yù)防ox-LDL誘導(dǎo)的冠脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷對(duì)于預(yù)防冠心病的發(fā)生,降低冠心病的致死率有重要意義。目前,已發(fā)現(xiàn)多種Micro-RNA參與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展,以往發(fā)現(xiàn)miR-130a在冠心病患者中表達(dá)異常,且在急性心肌梗死后的心肌細(xì)胞損傷的作用已明確,我們推測(cè)它可能在冠脈內(nèi)皮功能障礙中同樣發(fā)揮作用。本研究旨在探討miR-130a對(duì)靶基因PPAR-γ的調(diào)控在冠脈內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥反應(yīng)的影響,從分子水平為冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的診療提供新的研究方向。方法體外培養(yǎng)傳代原代人冠脈內(nèi)皮細(xì)胞（HCAECs）,（1）使用不同濃度的ox-LDL刺激正常HCAECs 24h,誘導(dǎo)損傷,通過細(xì)胞形態(tài)學(xué)的觀察確定損傷模型的建立,使用RTq PCR和蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot）檢測(cè)不同濃度ox-LDL刺激誘導(dǎo)損傷后冠脈內(nèi)皮細(xì)胞中miR-130a的表達(dá)差異及PPAR-γ的mR... 

【文章來源】：青島大學(xué)山東省

【文章頁(yè)數(shù)】：48 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

正常冠脈內(nèi)皮形態(tài)學(xué)表現(xiàn)（×100）；Box-LDL刺激后冠脈內(nèi)皮損傷形態(tài)學(xué)表現(xiàn)（×100）

青島大學(xué)碩士學(xué)位論文193.miR-130a抑制PPAR-γ的表達(dá)使用miR-130amimic、miR-130ainhibitor、miR-NC轉(zhuǎn)染細(xì)胞48h后，使用RT-qPCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染效果，結(jié)果顯示，與對(duì)照組和miR-NC組相比，miR-130amimic組miR-130a的表達(dá)水平明顯升高，miR-130ainhibitor的表達(dá)水平明顯減低,轉(zhuǎn)染效果明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。miR-NC組較對(duì)照組miR-130a的表達(dá)水平無明顯變化（圖3A）。給予上述3組細(xì)胞80μg/mL的ox-LDL刺激24h，對(duì)照組不進(jìn)行轉(zhuǎn)染，直接使用80μg/mL的ox-LDL刺激細(xì)胞24h。使用RT-qPCR對(duì)PPAR-γ的mRNA表達(dá)量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果顯示，與對(duì)照組和miR-NC組相比，miR-130amimic抑制了PPAR-γ的mRNA水平的表達(dá)，而miR-130ainhibitor促進(jìn)了PPAR-γ的mRNA的表達(dá)，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；miR-NC與對(duì)照組之間PPAR-γ的mRNA的表達(dá)無明顯差異（圖3B）。Westernblot檢測(cè)PPAR-γ蛋白表達(dá)差異，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，miR-130amimic組PPAR-γ蛋白表達(dá)降低，miR-130ainbibitor組PPAR-γ蛋白表達(dá)升高；且較miR-NC組相比，PPAR-γ表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。（P＜0.001）miR-NC組與對(duì)照組相比，PPAR-γ蛋白表達(dá)無明顯差異（圖3C、D）。說明miR-130a抑制了PPAR-γ在mRNA及蛋白水平的表達(dá)。圖3miR-130a對(duì)HCAECsPPAR-γ表達(dá)產(chǎn)生的影響A.使用miR-130a模擬物、抑制物和轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照轉(zhuǎn)染細(xì)胞后miR-130a的表達(dá)；B.miR-130a在mRNA水平對(duì)PPAR-γ表達(dá)的影響；C.miR-130a對(duì)PPAR-γ蛋白水平表達(dá)的影響。D.PPAR-γ的相對(duì)蛋白表達(dá)量。注：*表示與對(duì)照組相比，#表示與miR-NC組相比。**、##，P<0.01，***、###，P＜0.001。

4.miR-130a 促進(jìn) ox-LDL 誘導(dǎo)損傷后 HCAECs 細(xì)胞的炎癥反應(yīng) 使用 mi R-130a mimic、mi R-130a inhibitor、mi R-NC 轉(zhuǎn)染細(xì)胞 48h，再給予 80μg/mL的 ox-LDL 刺激細(xì)胞 24h，對(duì)照組不轉(zhuǎn)染，直接給與 80μg/mL 的 ox-LDL 刺激 24h。我們使用 ELISA 法檢測(cè)炎性 IL-6、IL-1β 及 TNF-α 的表達(dá)，結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，mi R-130a mimic 組炎性因子 IL-6、IL-1β 及 TNF-α 的表達(dá)明顯升高（P＜0.001），mi R-130a inhibitor 組炎性因子的表達(dá)明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。與 mi R-NC 組相比，mi R-130a mimic 組炎性因子 IL-6、IL-1β 及 TNF-α 的表達(dá)升高（P＜0.01），mi R-130a inhibitor 組炎性因子的表達(dá)降低（P＜0.01），mi R-NC 組與對(duì)照組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（圖 4）。說明了 mi R-130a 的過表達(dá)促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞損傷后炎癥因子的釋放。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]miRNA與動(dòng)脈粥樣硬化炎癥機(jī)制研究進(jìn)展[J]. 顧燕妮,謝春毅.  中國(guó)免疫學(xué)雜志. 2019(20)
[2]頸動(dòng)脈和冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的對(duì)比分析[J]. 沈胤伯,譚博,薛傑元,白佳潤(rùn),沈玲紅.  醫(yī)學(xué)綜述. 2018(22)
[3]年輕與老年小鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞microRNA的差異表達(dá)[J]. 張俊斌,朱小南,崔進(jìn),陳鵬,王深明,王勁松.  中華醫(yī)學(xué)雜志. 2012 (31)



本文編號(hào)：3480026