發(fā)布時間：2021-09-11 12:17

　　[背景與目的]:動脈粥樣硬化（atherosclerosis,As）是一種慢性炎癥性疾病,其中血管炎癥被認為是As發(fā)生發(fā)展的關鍵環(huán)節(jié)。當血管受損時,巨噬細胞作為免疫系統(tǒng)的主要效應細胞,被募集至受損部位并大量蓄積脂質(zhì)形成泡沫細胞;與此同時,泡沫細胞促進大量的巨噬細胞、T淋巴細胞等炎癥細胞聚集于損傷部位。這些免疫細胞可釋放各種炎癥介質(zhì)進一步促進泡沫細胞形成,形成惡性循環(huán),加劇As發(fā)生發(fā)展。巨噬細胞的相關調(diào)控機制是As疾病防治研究的重要環(huán)節(jié)。近年來,RNA修飾作為新興調(diào)控方式,其對疾病的影響已受到學者的廣泛關注。其中N6-甲基腺嘌呤（N6-methyladenosine,m6A）作為mRNA上最為豐富的修飾,對于基因轉(zhuǎn)錄、翻譯、表達調(diào)控等生命進程發(fā)揮著重要調(diào)控作用。m6A修飾是指腺嘌呤第6位N原子上的甲基化修飾,其中METTL3（methyltransferase like 3,METTL3）亞基是m6A甲基轉(zhuǎn)移酶復合體中的核心組分,在人體內(nèi)廣泛分布。近期研究發(fā)現(xiàn),METTL3過表達可以抑制脂肪水平并降低胞內(nèi)甘油三酯,另在心肌重構等功能中也發(fā)現(xiàn)METTL3具有重要調(diào)控作用。METTL3和m6... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

METTL3在人頸動脈動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)廣泛表達（黑色虛線所標記部位為斑塊壞死核心；Scalebar=100μm）

20圖4.2METTL3在小鼠As斑塊內(nèi)廣泛表達（圖A、B：Scalebar=100μm；圖C：Scalebar=20μm）巨噬細胞源性泡沫細胞是As斑塊中的重要成分。內(nèi)皮細胞受損后，單核細胞被募集到受損內(nèi)皮周圍分化成巨噬細胞，巨噬細胞荷脂后形成泡沫細胞，泡沫細胞隨即不斷分泌多種炎癥因子促進斑塊發(fā)展，斑塊部位聚集的泡沫細胞對于斑塊的穩(wěn)定和發(fā)展發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用。其中泡沫細胞的影響貫穿As整個周期。因此，本實驗進一步檢測在斑塊中巨噬細胞源性泡沫細胞中METTL3的表達情況。免疫熒光實驗將對此猜想進行驗證。選用MAC3標記巨噬細胞，DAPI染核，并通過不同的熒光二抗分別結合MAC3（紅）和METTL3（綠），將所得圖片通過軟件處理對二者表達進行共定位標記。熒光結果如下圖4.3所示，在小鼠As斑塊中，METTL3在斑塊中廣泛表達，箭頭所指部位即為METLL3和巨噬細胞標記物的共同表達部位，這一結果說明METTL3存在于巨噬細胞源性泡沫細胞中。

21圖4.3小鼠As斑塊中，METTL3在巨噬細胞源性泡沫細胞內(nèi)表達（B：小鼠As斑塊中，METTL3的表達；C：小鼠As斑塊中，巨噬細胞的表達；D：箭頭所指部位即為巨噬細胞源性泡沫細胞和METTL3共同表達部位；Scalebar=100μm）以上結果說明，METTL3在人和小鼠的As斑塊中均存在廣泛表達，并且在巨噬細胞源性泡沫細胞中也廣泛表達，METTL3與As斑塊之間可能存在密切聯(lián)系。為了進一步明確METTL3是否參與巨噬細胞源性泡沫細胞的相關調(diào)控，本項研究選取THP-1為研究對象，從細胞水平明確METTL3的調(diào)控作用。4.2METTL3和m6A修飾在巨噬細胞源性泡沫細胞中上調(diào)巨噬細胞泡沫化后對斑塊穩(wěn)定和發(fā)展尤為重要。為明確METTL3在巨噬細胞源性泡沫細胞中的變化，實驗選取THP-1細胞經(jīng)PMA誘導后形成巨噬細胞，并予以不同濃度的ox-LDL孵育處理，24h后提取不同組別的蛋白質(zhì)，使用WB檢測不同濃度ox-LDL的處理下METTL3的表達變化。結果顯示經(jīng)ox-LDL孵育后，METLL3的表達隨ox-LDL濃度增加而出現(xiàn)增長（圖4.4）。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]巨噬細胞凋亡與動脈粥樣硬化[J]. 張艷,林玉壁,孫雷.  中國動脈硬化雜志. 2008(05)



本文編號：3392984