發(fā)布時間：2021-09-08 14:55

　　背景急性心肌梗死（Acut myocardial infarction,AMI）是一種在動脈粥樣硬化基礎(chǔ)上,因血栓形成或斑塊破裂阻塞血管而導(dǎo)致的心肌急性缺血缺氧性疾病,在全球范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率極高,嚴(yán)重危害人類健康。大量研究表明,細(xì)胞缺氧狀態(tài)能夠激活氧化應(yīng)激反應(yīng),其產(chǎn)生的活性氧物質(zhì)（Reactive oxygen species,ROS）可作為信號分子介導(dǎo)細(xì)胞凋亡。同時,ROS的累積能夠引起包括DNA鏈斷裂、DNA位點突變等多種形式的DNA損傷。為了維持基因組的完整性和穩(wěn)定性,機(jī)體會啟動一系列DNA損傷反應(yīng)（DNA damage response,DDR）。DDR是一個復(fù)雜的反應(yīng)過程,經(jīng)典的DDR通路包括ATR/Chk1和ATM/Chk2通路。ATR和ATM均屬磷脂酰肌醇-3-激酶樣激酶家族（PI3K）成員,可通過激活下游細(xì)胞周期檢查點蛋白Chk1和Chk2等,引起一系列磷酸化級聯(lián)反應(yīng),介導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯與DNA修復(fù);當(dāng)修復(fù)失敗時,可進(jìn)一步激活多條死亡信號通路,最終導(dǎo)致細(xì)胞凋亡。有文獻(xiàn)報道,心肌梗死后,血循環(huán)中游離DNA水平會明顯升高,可以作為檢測心肌細(xì)胞損傷的靈敏指標(biāo),對疾病的監(jiān)控以... 

【文章來源】：河南大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：71 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
縮略詞表
1 前言
2 材料、試劑與儀器
    2.1 材料與試劑
    2.2 儀器
    2.3 試劑配制方法
3 實驗方法
    3.1 大鼠心肌梗死模型的建立
    3.2 新生大鼠原代心肌細(xì)胞（NRVMS）的分離及缺氧模型的建立
    3.3 大鼠心肌細(xì)胞系H9C2缺氧模型的建立
    3.4 HE染色
    3.5 TUNEL
        3.5.1 細(xì)胞
        3.5.2 石蠟切片
    3.6 免疫組化
    3.7 蛋白質(zhì)的提取及BCA法測定蛋白濃度
        3.7.1 細(xì)胞蛋白質(zhì)的提取
        3.7.2 BCA法測定蛋白濃度
    3.8 WESTERN BLOT
    3.9 免疫熒光
    3.10 流式細(xì)胞術(shù)
    3.11 細(xì)胞增殖活力實驗（MTT）
    3.12 乳酸脫氫酶檢測（LDH）
    3.13 CASPASE 3/7 活性檢測
    3.14 SIRNA的轉(zhuǎn)染
    3.15 統(tǒng)計學(xué)分析
4 實驗結(jié)果
    4.1 大鼠心肌組織
        4.1.1 心肌梗死后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化
        4.1.2 心肌梗死可誘導(dǎo)心肌細(xì)胞發(fā)生凋亡
        4.1.3 DNA損傷反應(yīng)參與大鼠心肌缺血缺氧性損傷
    4.2 大鼠心肌細(xì)胞系H9C2
        4.2.1 成功建立H9C2缺氧模型
        4.2.2 缺氧誘導(dǎo)H9C2細(xì)胞DNA損傷相關(guān)蛋白表達(dá)量增高
        4.2.3 阻斷ATR/Chk1通路對缺氧誘導(dǎo)的H9C2細(xì)胞損傷無影響
        4.2.4 阻斷ATM/Chk2通路對H9C2細(xì)胞缺氧性損傷有明顯改善作用
        4.2.5 干擾Chk2能夠減輕H9C2細(xì)胞缺氧性損傷
    4.3 大鼠原代心肌細(xì)胞（NRVMS）
        4.3.1 成功建立NRVMs缺氧模型
        4.3.2 阻斷ATM/Chk2通路對NRVMs缺氧性損傷有保護(hù)作用
討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
在讀期間參加的學(xué)術(shù)會議及研究成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]外周血循環(huán)DNA水平測定在急性心肌梗死中的臨床意義[J]. 徐運強(qiáng),劉蓓,趙召霞,王桂花,朱向輝,潘世揚(yáng),陳丹.  中國醫(yī)療器械雜志. 2012(06)
[2]ATM、ATR和DNA損傷介導(dǎo)的細(xì)胞周期阻滯[J]. 朱虹,繆澤鴻,丁健.  生命科學(xué). 2007(02)
[3]DNA損傷與腫瘤發(fā)生的研究進(jìn)展[J]. 謝成英,蔡育軍,丁健.  中國癌癥雜志. 2006(04)



本文編號：3390988