目的（1）構建低氧響應性的血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor,簡稱VEGF）真核表達載體,建立體內(nèi)、外遞送方法并對其效能進行鑒定;（2）以聚乳酸-羥基乙酸共聚物（Polylactic acid-glycolic acid copolymer,PLGA）作為藥物載體,探討載體粒徑對化藥、核酸等不同藥物釋放的影響,優(yōu)化針對不同藥物的載體粒徑參數(shù);（3）針對心肌梗死后的急性氧化應激與長期的缺氧微環(huán)境特征,采用模塊化和可控的層層組裝技術開發(fā)具有急性抗氧化與低氧響應型VEGF調(diào)控表達的智能藥物遞送系統(tǒng);（4）在體外細胞模型與心肌梗死小鼠模型中,對上述智能藥物遞送系統(tǒng)的心肌保護與心梗修復功能進行系統(tǒng)研究,以期建立新型的心肌梗死干預方法。方法（1）應用基因重組技術,在真核表達載體pGL4.73[hRluc/SV40]（pSV）質(zhì)粒基礎上,將2個串聯(lián)的低氧敏感性EPO增強子插入啟動子SV40上游,構建低氧響應型表達系統(tǒng)（pEPO-SV）,以海腎熒光素酶（Rluc）為下游報告基因,評價其低氧敏感性能;隨后,將VEGF165基因取代Rluc插入到pEPO... 

【文章來源】：錦州醫(yī)科大學遼寧省

【文章頁數(shù)】：90 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

重組質(zhì)粒構建注：EPO增強子通過酶切位點XhoⅠ和BglⅡ嵌入原質(zhì)粒pSV構建重組子，目的基因

VEGF165 通 過 酶 切 位 點 Hind Ⅲ 和 Xba Ⅰ 嵌 入 進 質(zhì) 粒 pEPO-SV ， 構 建 重 組 子pEPO-SV-VEGF。（二）質(zhì)粒 DNA 測序及酶切鑒定1、PCR 檢測。結果如圖 1.2 為不同質(zhì)粒中 EPO 增強子及 VEGF165 序列的 PCR 鑒定結果，圖 A 不通泳道從左向右依次為：Marker，分別以質(zhì)粒pcDNA3 .1、質(zhì)粒pSV-VEGF和pEPO-SV-VEGF為模板PCR擴增得到VEGF165目的基因片段，大約 500bp 處的亮帶（圖 A）；圖 B 泳道從左向右分別為 Marker、以質(zhì)粒 pEPO、pEPO-SV 和 pEPO-SV-VEGF 為模板，PCR 擴增得到 EPO 串聯(lián)增強子片段，大約 100bp 處的亮帶，如圖 B。

GAGGCCCTACGTGCTGTCTCACACAGCCTGTCTGAGGCGGCCCTACGTGCTGTCTCACACAGCCTGTCTGCCGGCGAGATCTGAGGCCCTACGTGCTGTCTCACACAGCCTGTCTGAGGCGGCCCTACGTGCTGTCTCACACAGCCTGTCTGCCGGCGAGATCT與測序序列完全匹配。驗證。進一步通過酶切與 DNA 電泳驗證質(zhì)粒 pE成功插入，通過 HindⅢ和 XbaⅠ對質(zhì)粒 pEPO-S通過瓊脂糖凝膠電泳進行檢測。瓊脂糖凝膠電泳檢帶，500-750bp 區(qū)間條帶與所插入的 VEGF165 成功插入；大于 2000bp 的條帶區(qū)為切出的質(zhì)粒骨

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Stem cell mechanisms during left ventricular remodeling post-myocardial infarction:Repair and regeneration[J]. Rogelio Zamilpa,Mary M Navarro,Iris Flores,Sy Griffey.  World Journal of Cardiology. 2014(07)
[2]氯化鈷誘導心肌細胞化學性缺氧HIF-1α表達的研究[J]. 石朔,王利華,郭睿,張敏,苗瑩,張淼,李彪.  診斷學理論與實踐. 2013(05)
[3]乳酸-羥基乙酸共聚物微球、納米粒載藥體系的研究進展[J]. 陳紅麗,劉瑞,南文濱.  中國藥房. 2012(37)
[4]VEGF165基因治療對心肌梗死大鼠心功能和心肌細胞凋亡的影響[J]. 楊德寨,尹瑞興,吳海,黃凱,巫相宏,陳宇明.  廣西醫(yī)科大學學報. 2005(02)



本文編號：3366333