Micro RNA（miRNA）是一類小的,長度約在18-25個堿基左右的非編碼RNA,在動物體內(nèi),絕大多數(shù)的miRNAs通過與3’-UTR（非編碼區(qū)）中的靶基因的互補區(qū)結合來抑制靶基因向蛋白的轉化,通過這種方式,miRNAs便可在無論是細胞、組織還是個體水平上,影響生物體的生長和發(fā)育,并同時參與各種疾病過程,因此,miRNAs的檢測對其調(diào)控的相關疾病的研究具有重要意義。但miRNAs的含量非常低,通常情況下很難對實際樣中的疾病相關miRNAs直接進行檢測,故本文便以此為目標,建立了一個超靈敏實時檢測與急性心肌梗死相關的miRNAs的化學發(fā)光平臺,主要研究內(nèi)容可大致分為以下兩部分:第一部分是有關G4/MOFzyme化學發(fā)光檢測平臺的構建。本實驗主要以血紅素為有機配體,以鋅離子為金屬配體,合成以血紅素（hemin）橋連的金屬有機框架材料（MOF）。此MOF材料因有血紅素的存在,可以給G-四鏈體（G4）提供大量的結合位點,從而可在材料的表面裝載G4-血紅素DNA酶。于是,在此基礎上,我們便將合成的Zn-hemin MOF材料與滾環(huán)擴增核酸放大技術結合,利用目標miRNAs（miRNA-13... 

【文章來源】：中國科學技術大學安徽省 211工程院校 985工程院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１描述常見有機分子的電子能級和不同的單重態(tài)和三重態(tài)之間可能躍遷的雅布隆斯基??圖．??通常，化學發(fā)光反應可由兩種基本機制產(chǎn)生（圖１．２）

、氣相和液相中能有大量的實際應用［２］。??Ａ?十?Ｂ?十?（Ｃｏｆａｃｔｏｒｓ）??（Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ?（Ｏｘｉｄａｎｔ）??ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ）??Ｃａｔａｌｙｓｔ??Ｎ．＂??＾ｒｅｃ＾?Ｐ＊?｛ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ?ｏｒ?ｐｒｏｄｕｃｔ）??ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ＾?Ｓｅｎｉｔｉｚｅｄ?ｏｒ?ｅｎｅｒｇｙ?ｔｒａｎｓｆｅｒ??ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ??Ｐ?十?／ｉｖ??Ｐ＋?ｆｉｒ??ｉ??Ｆ十ｆｃｖ??圖１．２化學發(fā)光反應的種類（兩種反應機理）??１．１．２化學發(fā)光產(chǎn)生的必要條件及其影響因素??對于一個要產(chǎn)生光的化學反應，其必須滿足以下幾個條件：??（１）反應必須是放熱的，才能產(chǎn)生足夠的能量形成電子激發(fā)態(tài)；??（２）反應途徑必須有利于為電子激發(fā)態(tài)的形成提供能量。如果化學能以熱的形??式損失，例如通過振動和轉動能的方式，反應就不會是化學發(fā)光。??（３）與其他競爭性非輻射過程相比，光子發(fā)射必須是激發(fā)產(chǎn)物的一個有利的失??活過程，或者即使同時存在其他競爭性的非輻射過程，在超靈敏的化學發(fā)??光發(fā)生的情況下，其他競爭性非輻射過程的比例也要很�。▓D】．３），這包??括了激發(fā)態(tài)物質(zhì)與熒光團之間的能量轉移效率，并且后者的能量轉移效率??明顯更為重要。??２??

核酸⑶。如今，ＲＣＡ己被廣泛應用于核酸＋５］、蛋白??［６］、金屬離子［７］等的靈敏檢測。若將化學發(fā)光技術與滾環(huán)擴增結合，則可大大提??高檢測的靈敏度和特異性。ＺｅｎｇＷ等人就將ＲＣＡ和ＣＬ聯(lián)用以對ＤＮＡ甲基轉移??酶進行檢測。在ＤＮＡ腺嘌呤甲基化（Ｄａｍ）甲基轉移酶的存在下，發(fā)夾探針可??以被甲基化并被限制性核酸內(nèi)切酶Ｄｐｎ?Ｉ剪切，從而產(chǎn)生ＲＣＡ的引物，這個引??物可與環(huán)狀模板ＤＮＡ進行雜交并啟動ＲＣＡ的進行，產(chǎn)生大量的可催化ｌｕｍｉｎｏ丨－??出０２化學發(fā)光反應的ＤＮＡ酶（如圖１．４所示）。此法相對于許多傳統(tǒng)的檢測甲??基轉移酶的方法［９］而言具有非常高的優(yōu)越性，因其最低檢測限可達１．２９ＸＫＴ４??Ｕ?？?ｍＬ＿Ｉ〇??〇＝?Ｌｕｎｉｉｎ？ｌ＋＊?Ｋ?Ｈ２Ｏ??Ｈａｉｒｐｉｎ?ｐｒｏｂｅ?＼）ｔＰ￣??Ｄａｍ?Ｌｕｍｉｎｏｌ?Ｈ２０２??＾?，ｒＳＡＭ?？?Ｈｅｍ?ｉｎ??ｃｈ３??貴?Ｎ．ｋ．?ｄ?〇〇＾??Ｎｉｃｋｉｎｇ?ｍ?（?Ｈ；??ｆｓ?Ｄｐｎ?Ｉ?ｅｎｚ＞?ｒａｅ?Ｌ?＾?＾??，?＂Ｏ＾?］■〇??３?Ｘ?ＣＨ３?ｉ—－??〇?Ｃｉｒｃｕｌａｒ?ｔｅｍｐｌａｔｅ?嚴?ｍ?〇??Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ?＾?＾??〇?一?０??圖１．４基于引物（ｐｒｉｍｅｒ）誘導的滾環(huán)擴增對ＤＮＡ腺嘌呤甲基化（Ｄａｍ）甲基轉移酶的化??學發(fā)光檢測實驗［８］。??１．?１．３．?２化學發(fā)光與等溫指數(shù)擴增技術的聯(lián)用??等溫指數(shù)擴增（ＥＸＰＡＲ）能對短鏈核苷酸進行快速擴增，其擴增效率非常高，??通常在幾分鐘內(nèi)便可擴增到１０６－１０９倍１１Ｇ］，因此其被廣泛應用于ＤＮＡ、ＲＮＡ以??及蛋白ｔ１


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