發(fā)布時(shí)間：2021-08-11 04:20

　　目的:構(gòu)建動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型,探究動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的不同階段時(shí)RNF10（環(huán)指蛋白10）表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化以及平滑肌細(xì)胞生物學(xué)特性的變化情況。方法:選取ApoE基因敲除鼠（ApoE-/-）共24只,采用空氣干燥法損傷小鼠的頸動(dòng)脈并以高脂飼料進(jìn)行飼養(yǎng),誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化的形成。將24只小鼠中隨機(jī)分為A、B、C、D四組（每組6只）,其中A組作為正常對(duì)照組（小鼠不做頸動(dòng)脈損傷處理并采用普通飼料飼養(yǎng)）,B組小鼠在頸動(dòng)脈損傷后采用高脂飼料連續(xù)喂養(yǎng)8周,C組小鼠在頸動(dòng)脈損傷后采用高脂飼料連續(xù)喂養(yǎng)12周,D組小鼠在頸動(dòng)脈損傷后采用高脂飼料連續(xù)喂養(yǎng)16周。在各時(shí)間點(diǎn)處死小鼠,分離平滑肌細(xì)胞并進(jìn)行原代培養(yǎng)。頸動(dòng)脈樣本進(jìn)行HE染色和油紅O染色并觀察,采用免疫組化檢測RNF10、SMA、SMHC、VEGF的表達(dá)情況。采用免疫熒光對(duì)細(xì)胞進(jìn)行鑒定,CCK8實(shí)驗(yàn)檢測各組細(xì)胞的增殖活性,流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期及凋亡情況,采用劃痕實(shí)驗(yàn)來檢測各組細(xì)胞遷移能力的變化,蛋白免疫印跡法檢測平滑肌細(xì)胞中RNF10、SMA和SMHC蛋白的表達(dá)水平,細(xì)胞免疫熒光檢測各組平滑肌細(xì)胞表型的變化情況。結(jié)果:HE實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示B組樣本中... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：66 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

四組組織樣本的HE染色結(jié)果；第一行為鏡下20X觀察結(jié)果,第二行為同一視野鏡下40X觀察結(jié)果

第3章結(jié)果15染色，視野中染色面積占總面積的比率為30%；C組中脂質(zhì)沉積明顯，有大量染色區(qū)域，視野中染色面積占總面積的比率為60%；D組中出現(xiàn)局部深染色，視野中染色面積占總面積的比率約為90%。圖2各組動(dòng)脈組織的冰凍油紅O染色結(jié)果；第一行為鏡下10X視野所見,第二行為同一視野鏡下20X觀察結(jié)果。3.3免疫組織化學(xué)染色結(jié)果各組免疫組化染色結(jié)果見圖3。A組中可見組織內(nèi)RNF10、SMA和SMHC染色強(qiáng)陽性，VEGF染色陰性。B組斑塊組織內(nèi)RNF10、SMA和SMHC染色陽性，VEGF染色陽性。C組中組織內(nèi)SMA和SMHC染色弱陽性，VEGF染色強(qiáng)陽性。D組中組織內(nèi)SMA和SMHC染色陽性，VEGF染色陽性。各指標(biāo)在各組中的具體染色評(píng)分見表1。據(jù)陽性染色物質(zhì)的定位，可見RNF10主要存在于泡沫細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)。結(jié)果提示：隨著粥樣硬化程度加深，RNF10在斑塊內(nèi)的表達(dá)呈現(xiàn)逐漸下降然后趨于穩(wěn)定的趨勢，SMA和SMHC在AS進(jìn)程中，其在平滑肌細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)呈現(xiàn)出逐漸下降然后小幅度上升的趨勢。RNF10、SMA和SMHC的免疫組化結(jié)果見圖3。

第3章結(jié)果16表1各組細(xì)胞中各個(gè)指標(biāo)的免疫組化染色評(píng)分結(jié)果groupRNF10SMASMHCVEGFA10.6±1.111.0±0.410.5±0.62.5±0.4B6.2±0.57.6±0.57.8±0.48.6±0.8C4±0.65.7±0.74.9±0.811.2±0.5D5.2±0.88.2±0.67.5±0.57.9±1.2細(xì)胞胞漿或者細(xì)胞核染色深黃或棕色作為染色陽性，分?jǐn)?shù)在0～3分判定為陰性，4～6分為弱陽性，6-9分為陽性，9-12則判定為強(qiáng)陽性，分?jǐn)?shù)越高代表靶基因表達(dá)程度越高。圖3四組組織樣本的RNF10、SMA、SMHC和VEGF指標(biāo)免疫組化結(jié)果3.4SMC原代細(xì)胞鑒定通過免疫熒光技術(shù)檢測SMC細(xì)胞特異性蛋白α-SMA的表達(dá)，結(jié)果如圖1所示，在細(xì)胞上檢測到α-SMA的表達(dá)，表明該細(xì)胞為SMC細(xì)胞。免疫熒光技

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]快速構(gòu)建不穩(wěn)定型動(dòng)脈粥樣硬化小鼠模型的方法研究[J]. 黃凌晶,付春梅,方代龍,金全勝,宋相容,劉詠梅.  中國新藥雜志. 2019(03)
[2]ApoE基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型構(gòu)建[J]. 梁璐,洪瑞云,周敏,張毅,鄒海林,鐘一鳴,王烈峰.  贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2017(03)
[3]ApoE缺陷大鼠動(dòng)脈粥樣硬化模型的構(gòu)建[J]. 徐敏,韋舒杰,張彥,嚴(yán)鵬,蘇立男,李瑩,馬雙陶,李德,楊永健.  中國動(dòng)脈硬化雜志. 2017(01)
[4]胰島素樣生長因子-1對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化處血管平滑肌細(xì)胞的影響[J]. 呂淑萍,尚茹茹,張錦,李飛虹,王興興,文仙仙,劉曉紅.  中華臨床醫(yī)師雜志(電子版). 2016(22)
[5]可溶性血管內(nèi)皮生長因子受體1對(duì)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的作用[J]. 周儀華,王舒,袁影.  中國組織工程研究. 2016(18)
[6]動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型構(gòu)建的方法與現(xiàn)狀[J]. 黃愛良,黃榮志,黃小倩,黃建華,周燕.  中國組織工程研究. 2015(27)
[7]血管內(nèi)皮生長因子和低氧誘導(dǎo)因子1α在頸動(dòng)脈粥樣硬化性狹窄患者血清中的表達(dá)及臨床意義[J]. 高峽,陳俊.  血栓與止血學(xué). 2015(03)
[8]中國心血管病報(bào)告2013概要[J]. 陳偉偉,高潤霖,劉力生,朱曼璐,王文,王擁軍,吳兆蘇,胡盛壽.  中國循環(huán)雜志. 2014(07)
[9]Paramyxovirus evasion of innate immunity: Diverse strategies for common targets[J]. Michelle D Audsley,Gregory W Moseley.  World Journal of Virology. 2013(02)

博士論文
[1]RNF10對(duì)代謝紊亂大鼠頸動(dòng)脈再狹窄的作用和機(jī)制研究[D]. 余貴泉.重慶醫(yī)科大學(xué) 2018

碩士論文
[1]Apoe和Ldlr基因敲除大鼠動(dòng)脈粥樣硬化疾病模型的構(gòu)建及其表型比較研究[D]. 趙永亮.華東師范大學(xué) 2016



本文編號(hào)：3335439