流式細(xì)胞術(shù)（flow cytometry）可以實(shí)現(xiàn)高速、逐一的細(xì)胞定量分析和分選,是研究和診斷血液病的重要手段之一。但是由于不同實(shí)驗(yàn)所用細(xì)胞和實(shí)驗(yàn)條件不同,經(jīng)常存在抗原陰性細(xì)胞非特異染色等問(wèn)題。利用抗體滴定法,可通過(guò)計(jì)算、比較染色指數(shù),得到使抗原陽(yáng)性細(xì)胞群和陰性細(xì)胞群達(dá)到最佳分離效果的實(shí)驗(yàn)條件。為了優(yōu)化血液細(xì)胞流式細(xì)胞術(shù)中熒光抗體染色的實(shí)驗(yàn)條件,以小鼠骨髓細(xì)胞為被標(biāo)記細(xì)胞,選擇利用非串聯(lián)熒光染料FITC標(biāo)記的大鼠抗小鼠CD11b抗體（FITC Rat Anti-Mouse CD11b）和串聯(lián)熒光染料APC-eFluor780標(biāo)記的大鼠抗小鼠CD11b抗體（APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b）進(jìn)行標(biāo)記。通過(guò)計(jì)算不同濃度抗體標(biāo)記小鼠骨髓細(xì)胞的染色指數(shù)進(jìn)行抗體滴定,確定合適的抗體濃度區(qū)間,進(jìn)而分析細(xì)胞數(shù)量、染色時(shí)間及固定步驟對(duì)抗體染色指數(shù)的影響,探究影響血液細(xì)胞抗體染色的關(guān)鍵因素。結(jié)果顯示,FITC Rat Anti-Mouse CD11b和APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b的濃度分別在0.156～2.500μg·mL

【文章來(lái)源】：生物技術(shù)進(jìn)展. 2020,10(03)

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【部分圖文】：

抗體濃度對(duì)抗體染色指數(shù)的影響

可見即使是針對(duì)同一抗原表位的不同抗體,進(jìn)行樣品標(biāo)記的合適的細(xì)胞數(shù)量范圍也不盡一致。如本實(shí)驗(yàn)中,非串聯(lián)熒光染料標(biāo)記的抗體在一定范圍內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的改變不會(huì)對(duì)染色效果有明顯的影響,而串聯(lián)熒光染料標(biāo)記的抗體則對(duì)細(xì)胞數(shù)增加更為敏感。總之,無(wú)論是何種抗體,如果進(jìn)行較多數(shù)量的細(xì)胞染色(如進(jìn)行細(xì)胞分選),有必要對(duì)合適的抗體濃度重新進(jìn)行滴定,以免影響染色效果。2.3 染色時(shí)間對(duì)抗體染色效果的影響

雖然染色后的新鮮標(biāo)本立即進(jìn)行流式細(xì)胞分析最為理想,但是有時(shí)受實(shí)驗(yàn)安排及儀器所限,需要對(duì)樣本進(jìn)行PFA固定后次日再進(jìn)行分析。為了研究PFA固定步驟對(duì)細(xì)胞染色效果的影響,在細(xì)胞數(shù)量(1×106 cells·管-1)、抗體濃度(1.25 μg·mL-1)和染色時(shí)間(30 min)不變的情況下,比較了FITC Rat Anti-Mouse CD11b和APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b抗體在PFA固定前后染色指數(shù)的變化。如圖4所示,FITC Rat Anti-Mouse CD11b抗體染色經(jīng)2% PFA固定24 h后,染色指數(shù)從25.34降為9.91,可見固定前后的染色效果顯著下降(P<0.01)。APC-eFluor780 Rat Anti-Mouse CD11b抗體染色經(jīng)2% PFA固定24 h后,染色指數(shù)從38.81降為24.86,固定步驟使染色效果顯著下降(P<0.05)�？梢�,PFA溶液固定會(huì)使非串聯(lián)熒光染料與串聯(lián)熒光染料抗體染色效果均顯著下降。3 討論

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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