目的：分析總結鐵劑難治性缺鐵性貧血（IRIDA）患者臨床特征及其跨膜絲氨酸蛋白酶6（TMPRSS6）基因突變情況,提高對鐵劑難治性缺鐵性貧血（IRIDA）的認識。方法：采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測臨床表現(xiàn)疑似IRIDA的患者外周血hepcidin水平,符合IRIDA診斷者納入本次研究�？偨Y其血液學特征；PCR擴增及測序方法檢測分析其家系TMPRSS6基因突變情況；通過Swiss-Model及Alamut軟件預測分析相應突變對TMPRSS6基因轉錄、翻譯及蛋白空間結構的影響；實時熒光定量PCR（RQ-PCR）檢鋇TMPRSS6基因mRNA表達水平。結果：本次研究共納入4個IRIDA家系中5例IRIDA患者。臨床表現(xiàn)為輕中度小細胞低色素貧血,MCV、MCH極低、血清鐵及轉鐵蛋白飽和度明顯減低,血漿hepcidin明顯高于獲得性IDA患者,對補鐵治療尤其是口服補鐵治療缺乏網(wǎng)織紅細胞和血紅蛋白升高反應。TMPRSS6基因（參考序列NM153609.2）檢測發(fā)現(xiàn)1例患者7號外顯子c.757A>G（K253E）純合子錯義突變；計算機模擬分析預測該突變可導致TMPRSS6蛋白空間構象改... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：98 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

TMPRSS6結構示意圖

圖2.TMPRSS6溶解曲線. PCR擴增TMPRSS6編碼區(qū)c.lll3G>A兩端cDNA1)引物設計針對c.in3G>A位點上下游設計引碼序列為模板，在Primer5軟件中設計包含c.l 1的PCR雙向引物，后在NCBI的BLAST數(shù)據(jù)有同源序列（表3)。表 3. TMPRSS6 c.lll3G>A 上下游引物Primer sequences (F = forward, R = reverse)F: ATGGCGGTCGTCTGGAAGAAGGGR: GATCTGGGAGGTGAAGTTGATGGTGA

A.細胞內(nèi)鐵（+ ) B.?細胞外鐵（++)圖3.患者A骨髓涂片鐵染色骨髓涂片鐵染色（xlOO倍，普魯士藍反應）：A -細胞內(nèi)鐵幼紅細胞內(nèi)鐵顆粒明顯減少，顆粒細小，鐵粒幼細胞較少見；B -細胞外鐵骨髓小粒中可見較多呈藍色小片狀分布的鐵顆粒，部分呈深藍色粗顆粒狀或塊分布外周血血衆(zhòng)hepcidin檢測結果顯示，健康成人hepcidin水平為157.02(15.18-357.28)ng/ml； 8例經(jīng)補鐵治療有效的IDA患者補鐵治療前外周血hepcidin水平 5.19 (3.31-12.02) ng/ml; A 患者就診時 hepcidin 水平血楽 213. H ng/ml,與獲得性缺鐵性貧血患者相比明顯升高。TMPRSS6基因檢測顯示患者TMPRSS6基因7號外顯子存在純合子c.757A>G(K253E)突變，導致TMPRSS6蛋白第253位賴氨酸被谷氨酸替代，發(fā)生K253E錯義突變（圖4)，其父母均為該位點雜合子突變。通過Swiss-Model分析發(fā)現(xiàn)TMPRSS6蛋白第253位氨基酸由賴氨酸突變?yōu)楣劝彼岷�，三維結構模型顯示，突變后TMPRSS6蛋白絲氨酸蛋白酶活性區(qū)、SEA、


本文編號：3242105