目的:本實(shí)驗(yàn)主要目的是研究BBR在細(xì)胞水平抗缺氧/復(fù)氧損傷中的作用機(jī)制,并利用AMPKα的抑制劑Compound C,深入討論BBR對(duì)抗心肌缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用是否通過AMPKα蛋白介導(dǎo)。方法:在本實(shí)驗(yàn)中,以大鼠H9c2心肌細(xì)胞作為實(shí)驗(yàn)載體,通過體外心肌細(xì)胞缺氧/復(fù)氧（A/R）損傷模型模擬體內(nèi)心肌缺血再灌注（I/R）損傷模型。實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分成4組,每組重復(fù)6次,具體分組如下:（1）正常組（Control組）;（2）A/R組;（3）20μM BBR+A/R組;（4）20μM BBR+1μM Compound C+A/R組。MTS法檢測(cè)細(xì)胞存活率;分光光度法檢測(cè)LDH活性;蛋白免疫印跡法（Western Blotting,WB）檢測(cè)AMPKα蛋白的表達(dá);DCFH-DA法檢測(cè)心肌細(xì)胞內(nèi)ROS水平;AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法和TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。結(jié)果:1.與A/R組比較,20μM BBR預(yù)處理大鼠H9c2心肌細(xì)胞可減少LDH釋放,降低LDH活性,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）,增加細(xì)胞存活率（P<0.01）;2.蛋白免疫印跡法實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,20μM BBR預(yù)... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
第1章 引言
第2章 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞
    2.2 主要材料和試劑
    2.3 主要儀器和設(shè)備
    2.4 實(shí)驗(yàn)方法
        2.4.1 培養(yǎng)H9c2心肌細(xì)胞
        2.4.2 心肌缺氧/復(fù)氧(A/R)損傷模型的構(gòu)建及分組
        2.4.3 MTS法檢測(cè)H9c2心肌細(xì)胞存活率
        2.4.4 分光光度法檢測(cè)乳酸脫氫酶(LDH)的活性
        2.4.5 蛋白免疫印跡法(WesternBlotting)檢測(cè)AMPKα蛋白的表達(dá)
        2.4.6 流式細(xì)胞儀檢測(cè)H9c2心肌細(xì)胞內(nèi)ROS的生成情況
        2.4.7 AnnexinⅤ-FITC/PI雙染法檢測(cè)H9c2心肌細(xì)胞凋亡
        2.4.8 TUNEL法檢測(cè)H9c2心肌細(xì)胞凋亡
        2.4.9 數(shù)據(jù)處理
第3章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 BBR預(yù)處理對(duì)心肌細(xì)胞A/R損傷的保護(hù)作用
        3.1.1 BBR預(yù)處理對(duì)細(xì)胞存活率的影響
        3.1.2 BBR預(yù)處理對(duì)LDH活性的影響
    3.2 BBR預(yù)處理對(duì)AMPKα蛋白表達(dá)的影響
    3.3 BBR預(yù)處理對(duì)ROS生成的影響
    3.4 BBR預(yù)處理對(duì)細(xì)胞凋亡的影響
第4章 討論
第5章 結(jié)論與展望
    5.1 結(jié)論
    5.2 展望
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]中藥材黃連的研究現(xiàn)狀與展望[J]. 趙楠,李隆云,白志川.  重慶理工大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)). 2015(01)



本文編號(hào)：3229535