目的：研究顯示miR-27a/b參與調控動脈粥樣硬化（atherosclerosis, As）發(fā)生發(fā)展的眾多危險因素，其在As中的可能機制已由我們進行文獻歸納整理，并發(fā)表在《Atherosclerosis》，基于本研究團隊的工作，我們提出miR-27a/b通過調控影響膽固醇流出的關鍵蛋白ABCA1參與影響As的發(fā)生發(fā)展。因此，本論文擬探討miR-27a/b對ABCA1的表達及其介導的膽固醇流出的影響。方法：運用生物信息學的方法對miR-27a和miR-27b序列的保守性、區(qū)別、存在區(qū)域進行分析，并重點分析miR-27a/b與ABCA1的結合情況（包括保守性、結合位點、得分、結合自由能、結合堿基特征等）；雙熒光素酶報告基因檢測miR-27a/b與ABCA1的結合情況；轉染miR-27a/b mimics或inhibitor，采用qPCR和Western blot檢測人THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞、小鼠RAW264.7巨噬細胞源性泡沫細胞、人HepG2細胞中ABCA1mRNA和蛋白表達情況；采用H3標記的膽固醇孵育的方法，運用液體閃爍計數器（liquid scintillation co... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數】：63 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

膽固醇和脂肪酸代謝示意圖

蛋白等）[13,14]，將 pri-miRNA 加工成長約 70-100nt 具有莖環(huán)結構的—pre-miRNA，然后在轉運蛋白 Exportin-5 幫助下經 Ran-GTP-depen胞漿[14,15]。在細胞漿中，pre-miRNA 經同屬 RNase III 家族的 Dicer 家族的 Ago2 調節(jié)蛋白加工修飾，形成長約 22nt 的 microRNA RNA:miRNA*），Dicer 和 Ago2 繼續(xù)將雙鏈體剪切成成熟的單鏈（guidiRNA）和互補鏈（passenger strand 或 microRNA*）。兩條鏈的去向有iRNA 與 Ago 蛋白家族及 GW182/ TNRC6 等其它眾多蛋白組結合形成的核糖核蛋白沉默復合體(RNA-induced silencing complex, RISC)，m因動力學不穩(wěn)定，可能由核酸酶或Aog2本身的剪切活性所降解[14-16]（

Fig.3 miR-33 regulate lipid metabolism圖 3 miR-33 調控脂質代謝示意圖：膽固醇酯，FC：游離膽固醇，apoA-I：載脂蛋白 A-I，HDL：高密度脂蛋白，C1：C 型 1 類尼曼-匹克蛋白，ABCA1：三磷酸腺苷結合盒轉運體 A1，ABCG1：酸腺苷結合盒轉運體 G1，RIP140：受體相互作用蛋白 140. AMPK: 磷酸腺AMP）激活的蛋白激酶.CROT：肉堿 O 辛基轉移酶，HAHDB：羥烷基輔酶氫酶，CPT1A：肉毒堿棕櫚酰轉移酶 I，Exon：外顯子，SREBPF 是 SREBP碼基因。miR-33 的另一個亞基 miR-33b，與 miR-33a 高度同源，在種子區(qū)域外僅有兩苷酸不同，兩者有許多重疊交錯的靶基因，如 ABCA1、ABCG1 等，提示-33b 在膽固醇穩(wěn)態(tài)、脂肪酸氧化、甘油三酯合成方面也發(fā)揮重要作用，但低

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號：3228203