腺苷酸活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）激活具有抗纖維化的作用,但其具體機(jī)制仍不十分清楚。本研究擬在心臟成纖維細(xì)胞中,明確AMPK激活對血管緊張素Ⅱ（angiotensin Ⅱ,AngⅡ）引起的轉(zhuǎn)化生長因子β1（transforming growth factor-β1,TGFβ1）表達(dá)的作用及其具體機(jī)制。分離培養(yǎng)成年小鼠心臟成纖維細(xì)胞,酶聯(lián)免疫吸附實驗檢測TGFβ1蛋白表達(dá),免疫印跡實驗檢測AMPK活性和CCAAT/增強子結(jié)合蛋白β（CCAAT/enhancer-binding proteinβ,C/EBPβ）表達(dá),雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灆z測TGFβ1轉(zhuǎn)錄活性。結(jié)果顯示,給予AMPK激活劑AICAR預(yù)處理可以抑制AngⅡ引起的TGFβ1產(chǎn)生增加,這一抑制作用可被AMPK抑制劑Compound C逆轉(zhuǎn)。生物信息學(xué)分析顯示在小鼠Tgfb1啟動子區(qū)存在C/EBPβ轉(zhuǎn)錄因子可能的結(jié)合位點。雙熒光素酶報告基因?qū)嶒灡砻?對于轉(zhuǎn)染Tgfb1啟動子區(qū)序列質(zhì)粒的小鼠胚胎成纖維細(xì)胞,AngⅡ可以增加TGFβ1轉(zhuǎn)錄活性;但是對于轉(zhuǎn)染缺失C/EBPβ結(jié)合位點的... 

【文章來源】：生理學(xué)報. 2017,69(02)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 試劑
    1.2 成年小鼠心臟成纖維細(xì)胞的分離及培養(yǎng)(在無菌條件下操作)
    1.3 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞的分離及培養(yǎng)(在無菌條件下操作)
    1.4 Western blot
    1.5 酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)
    1.6 結(jié)合位點預(yù)測
    1.7雙熒光素酶報告基因檢測
    1.8 數(shù)據(jù)分析
2 結(jié)果
    2.1 AMPK激動劑AICAR抑制Ang II引起的TGFβ1表達(dá)
    2.2 AICAR與Compound C對成年小鼠心臟成纖維細(xì)胞AMPK活性的影響
    2.3 C/EBPβ介導(dǎo)Ang II引起的TGFβ1轉(zhuǎn)錄表達(dá)
    2.4 AICAR抑制Ang II引起的C/EBPβ表達(dá)
3 討論



本文編號：3220416