研究背景與研究目的:心臟是哺乳動物發(fā)育過程中第一個形成的器官,血管發(fā)生及血管生成是心血管發(fā)育過程中的關(guān)鍵步驟,血液及營養(yǎng)物質(zhì)通過心血管系統(tǒng)泵送全身組織,對胚胎發(fā)育極為重要。心肌細胞（Cardiomyocytes,CMCs）、血管平滑肌細胞（Vascular smooth muscle cells,VSMCs）是心血管系統(tǒng)的主要組成成分,CMCs和VSMCs的增殖、分化受損將導(dǎo)致多種心血管疾病的發(fā)生。TEAD1 與CMCs、VSMCs基因的MCAT元件結(jié)合,在血清應(yīng)答因子SRF、Myocardin等協(xié)同作用下,調(diào)控MCAT元件依賴性肌特異性基因的表達。Pitx2是介導(dǎo)心血管左右不對稱發(fā)育的關(guān)鍵信號分子,Pitx2c與Myocardin在CMCs、VSMCs分化過程中起著重要作用。然而,Pitx2c和Myocardin的調(diào)節(jié)表達機制,及Pitx2c和Myocardin在調(diào)節(jié)平滑肌特異性基因表達中的功能關(guān)系仍不清楚。TEAD1對血管發(fā)育的影響及TEAD1與Pitx2c之間調(diào)控作用關(guān)系的文章未見報道。本文以SM22a-Cre為啟動子,在CMCs、VSMCs特異性敲除TEAD1基因,揭示TEAD... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：118 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

小鼠胚胎基因型鑒定及敲除TEAD1驗證

摯杉?鲅?謀洌歡??FF、FW 及 Het 組胚胎發(fā)育正常（圖1.2 A、B、C）。這提示我們 TEAD1 對于胚胎的正常發(fā)育不可或缺、TEAD1 基因缺失將導(dǎo)致胚胎死亡，但半劑量的 TEAD1 基因（Het 組）可維持胚胎的正常發(fā)育。我們對本實驗所有雜交繁殖所得的胚胎進行統(tǒng)計，得到每種基因型的胚胎分布如下表，在 E14.5 后，未能檢測到 KO 基因型胚胎。

體動物實驗部分：心血管系統(tǒng)特異性敲除 TEAD1 基因?qū)ε吖怙@微鏡下觀察 GFP 表達情況。結(jié)果顯示在 Het 組細胞發(fā)綠色熒光，而心臟外皮、內(nèi)皮細胞及其他組織性組織，這表明 SM22a 有效的啟動了 Cre 酶的表達（1 敲除后對心臟發(fā)育的影響，取 E12.5 及 E13.5 的石E 染色。我們發(fā)現(xiàn)與對照組相比，E12.5、E13.5 的 K肌小梁發(fā)育不良，CMCs 數(shù)量減少，但對于 TEAD1影響（圖 B、C）。通過對 E12.5、E13.5 心臟左室、組室壁厚度顯著減少（圖 D，對照組 N=4，KO 組 N=鼠心臟發(fā)育在 E14.5 室間隔膜部發(fā)育完全、左右心室1 后的 E14.5 期，我們觀察到室間隔缺損及右室雙流E），這提示我們 TEAD1 基因表達缺陷與先天性心臟，TEAD1 基因突變或參與了人類先天性心臟病的發(fā)臨床預(yù)防、篩查診斷先天性心臟病的新靶點。


本文編號：3208447