目的研究髓系惡性腫瘤部分巖藻糖基轉移酶基因的表達情況，基因包括斑馬魚巖藻糖基轉移酶基因（DF1、DF2、DF7、DF8、DF9、DF10、DF11）和參與人類ABH血型抗原和Lewis血型抗原形成的巖藻糖基轉移酶基因（FUT1、FUT2、FUT3、FUT6、FUT7）。方法應用實時熒光定量逆轉錄-聚合酶鏈反應（real-time fluorscence quantitativereverse transcription-polymerase chain reaction，F(xiàn)Q RT-PCR）檢測具髓系表型的MYCN轉基因型斑馬魚系巖藻糖基轉移酶基因、HL-60人原髓細胞白血病細胞和急性髓細胞白血�。ˋML）/骨髓增生異常綜合征（MDS）患者FUT1/2/3/6/7基因的表達，同時分別以野生型（WT）斑馬魚系、正常CD34（+）細胞和健康體檢者作為各自的正常對照進行相應表達分析研究。結果斑馬魚巖藻糖基轉移酶7、8、9、10、11基因在MYCN轉基因型斑馬魚系和野生型斑馬魚系的相對表達情況分別為：4.858±0.203vs1.005±0.010、0.143±0.022vs1.040±0.1... 

【文章來源】：上海交通大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
目錄
前言
材料與方法
    1. 主要試劑
    2. 主要設備
    3. 研究對象
        3.1 野生型斑馬魚和 MYCN 轉基因斑馬魚
        3.2 HL-60 細胞與正常 CD34（+）細胞
        3.3 AML/MDS 患者及其正常對照樣本
    4. 細胞培養(yǎng)、計數(shù)、凍存和復蘇方法
        4.1 細胞培養(yǎng)
        4.2 細胞計數(shù)
            4.2.1 原理
            4.2.2 細胞計數(shù)方法
        4.3 細胞凍存和復蘇
            4.3.1 原理
            4.3.2 細胞凍存操作步驟
            4.3.3 細胞復蘇操作步驟
    5. 臨床樣本的收集
    6. 分離外周血單個核細胞
        6.1 原理
        6.2 操作步驟
    7. 總 RNA 的提取、鑒定
        7.1 實驗原理
        7.2 樣本預處理
        7.3 操作步驟
        7.4 總 RNA 的鑒定
    8. cDNA 的制備
        8.1 去除基因組 DNA
        8.2 反轉錄反應
    9. 實時熒光定量逆轉錄-聚合酶鏈反應（FQ RT-PCR）
        9.1 原理
        9.2 引物設計與合成
        9.3 反應體系和反應條件
        9.4 標準曲線的制備及線性范圍的確定
        9.5 PCR 產物的確定和溶解曲線的分析
    10. 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計學分析
結果
    1. 總 RNA 濃度和純度的鑒定
    2. RT-PCR 產物的鑒定
        2.1 熔解曲線和擴增曲線分析
        2.2 電泳結果分析
    3. 各基因標準曲線
    4. 巖藻糖基轉移酶基因的表達
        4.1 斑馬魚巖藻糖基轉移酶各基因的表達
        4.2 HL-60 細胞部分巖藻糖基轉移酶基因的表達
        4.3 AML/MDS 患者部分巖藻糖基轉移酶基因的表達
討論
    1. 巖藻糖基轉移酶生物學特性
    2. 巖藻糖基轉移酶基因實時熒光定量檢測方法的優(yōu)勢和優(yōu)化
        2.1 FQ RT-PCR 檢測方法的優(yōu)勢
        2.2 FQ RT-PCR 檢測方法的優(yōu)化
    3. 血液系統(tǒng)惡性腫瘤模式生物斑馬魚與巖藻糖基轉移酶
    4. HL-60 人原髓細胞白血病細胞與巖藻糖基轉移酶
    5. 人類惡性腫瘤與巖藻糖基轉移酶
    6. 總結
本實驗的創(chuàng)新點與不足
結論
參考文獻
附錄
致謝
學術論文和科研成果目錄


【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3171786