第一部分BCR-ABL1陽(yáng)性微泡的生物學(xué)特征及內(nèi)容物分析目的：微泡（MV）是一種新型的細(xì)胞間信息交流載體,具有豐富的生物學(xué)功能；MV的生物學(xué)功能由其攜帶的內(nèi)容物決定,不同應(yīng)激條件下MV的內(nèi)容物存在較大差異,是細(xì)胞的一種適應(yīng)性機(jī)制。本部分研究擬以K562細(xì)胞為代表,了解慢性髓性白血�。–ML）來源MV的生物學(xué)特性以及主要包含的內(nèi)容物,明確其功能指向；同時(shí)探討應(yīng)激狀態(tài)下K562細(xì)胞及其MV中miRNA表達(dá)譜等內(nèi)容物的改變。方法：體外培養(yǎng)K562細(xì)胞,采用梯度離心法收集MV；離心獲得的沉淀物以透射電鏡觀察,流式細(xì)胞儀分析其大小和表面標(biāo)志,同時(shí)采用PKH-26及CFSE等熒光染料染色沉淀物后于激光共聚焦和熒光顯微鏡下觀察；經(jīng)鑒定是MV后提取其中的RNA,實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)其中的BCR-ABL1表達(dá),熒光原位雜交（FISH）檢測(cè)其中的染色體片段；在此基礎(chǔ)上,采用低血清培養(yǎng)刺激K562細(xì)胞并收集其來源的MV,以正常培養(yǎng)的K562細(xì)胞及其MV作為對(duì)照,芯片檢測(cè)四個(gè)樣本中的miRNA表達(dá)譜；對(duì)比分析不同狀態(tài)下MV中miRNA表達(dá)譜的差異,生物信息學(xué)分析差異niRNA分子可能參與的生物學(xué)行為。最后,構(gòu)建... 

【文章來源】：華中科技大學(xué)湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：119 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

小歲手術(shù)過程

圖2.流式細(xì)胞儀檢測(cè)K562-MV.流式細(xì)胞儀以l.Oum微球設(shè)門，發(fā)現(xiàn)所檢測(cè)的MV大小均在1.0師以下，其中300nm、500nm和800nm是主要大小分布區(qū)，每個(gè)分布區(qū)的MV均攜帶有Annexin V分子的表達(dá)。2.饑餓應(yīng)激對(duì)K562細(xì)胞及其MV中miRNA表達(dá)譜的影響前期提取并送檢的RNA經(jīng)質(zhì)控后均合格，提示從MV能夠有效獲取足量mRNA及miRNA供芯片檢測(cè)(圖3)。根據(jù)信號(hào)檢測(cè)到的所有位點(diǎn)的熒光強(qiáng)度，去除和背景信號(hào)無(wú)顯著性差異的探針點(diǎn)后選取有效數(shù)據(jù)。通過對(duì)比實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組之間相同有效位點(diǎn)的信號(hào)強(qiáng)度比值即倍數(shù)差異（foldchange, FC,取FC>=2和FC<=0.5為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義），我們共在K562細(xì)胞和MV中均檢出了 977種miRNA的前體分子，四個(gè)樣本間具有顯著性差異的miRNA數(shù)見表1。[ru] 叫_|40_ ‘丨 30-30-20- ,20-10-0- ?一'、 .丄一上sT- 0 ‘ Y'"卞 I I I I I I"“‘ I I I I ‘ ‘ ‘ ‘ ‘ ‘ J ： [“"“^ ‘“20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 [s] 20 25 30 35 -10 45 50 55 60 65 (sj

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