目的探討髓過(guò)氧化物酶（MPO）對(duì)單核巨噬細(xì)胞（THP-1）、活性及基質(zhì)金屬蛋白酶-9（MMP-9）、組織金屬蛋白酶抑制劑1（TIMP-1）表達(dá)的影響。方法 2018年12月-2019年3月于�？谑腥嗣襻t(yī)院暨湘雅醫(yī)學(xué)院附屬�？卺t(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行實(shí)驗(yàn),設(shè)THP-1為對(duì)照組、MPO低、中、高劑量組（MPO終濃度分別為1.5、3.0、6.0μ/L）,各組每孔設(shè)6個(gè)平行樣,培養(yǎng)72 h。試驗(yàn)結(jié)束后,MTT法測(cè)定細(xì)胞活力,流式細(xì)胞儀測(cè)定細(xì)胞凋亡水平,實(shí)時(shí)熒光逆轉(zhuǎn)錄法（RT-PCR）及蛋白印跡法（WESTERN-BLOT）測(cè)定細(xì)胞MMP-9、TIMP-1基因和蛋白水平。結(jié)果與對(duì)照組比較,MPO低、中、高劑量組OD值、存活率水平明顯升高（P<0.05）,且隨著MPO劑量逐漸增加,各組OD值、存活率逐漸升高（P<0.05）。與對(duì)照組比較,MPO低、中、高劑量組凋亡率水平降低（P<0.05）,且隨著MPO劑量逐漸增加,各組凋亡率逐漸降低（P<0.05）。與對(duì)照組比較,MPO低、中、高劑量組MMP-9 mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯升高（P<0.05）,TIMP-1mRNA和蛋白表... 

【文章來(lái)源】：新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,43(04)

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各組THP-1巨噬細(xì)胞凋亡情況

動(dòng)脈粥樣硬化是全球過(guò)早死亡病例的主要原因。臨床、遺傳和流行病學(xué)證據(jù)表明,低密度脂蛋白(LDL)水平升高是應(yīng)激的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素,而來(lái)自巨噬細(xì)胞的負(fù)載泡沫細(xì)胞是動(dòng)脈粥樣硬化的病理學(xué)標(biāo)志。體外試驗(yàn)中,LDL未能將巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化為負(fù)載泡沫細(xì)胞,這說(shuō)明LDL必須經(jīng)過(guò)修飾才能發(fā)揮致病作用。氧化途徑是改變LDL的一種重要機(jī)制,研究表明MPO與LDL氧化修飾密不可分[10]。MPO使由中性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞群分泌的血紅素蛋白。分子細(xì)胞學(xué)試驗(yàn)表明,由MPO-過(guò)氧化物系統(tǒng)體外修飾的LDL被巨噬細(xì)胞清道夫受體攝取;MPO存在于人類動(dòng)脈粥樣硬化組織中,與巨噬細(xì)胞共定位;這些觀察結(jié)果提供了MPO活躍于人類動(dòng)脈粥樣硬化組織的強(qiáng)有力證據(jù),LDL是其目標(biāo)之一[11]。臨床試驗(yàn)觀察到,在冠狀動(dòng)脈疾病的受試者中,MPO的血液水平升高,其預(yù)測(cè)不穩(wěn)定型心絞痛患者心肌梗死的風(fēng)險(xiǎn);在體外降低MPO表達(dá)的啟動(dòng)子多態(tài)性與臨床事件風(fēng)險(xiǎn)降低相關(guān)[12]。在小鼠動(dòng)脈粥樣硬化組織中的巨噬細(xì)胞用蛋白質(zhì)印跡檢測(cè)到高水平MPO。本研究結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,MPO低、中、高劑量組OD值、存活率水平升高,且隨著MPO劑量逐漸增加,MPO各劑量組OD值、存活率明顯升高。與對(duì)照組比較,MPO低、中、高劑量組凋亡率水平降低,且隨著MPO劑量逐漸增加,MPO各劑量組凋亡率明顯降低。這與上述討論一致,同時(shí)提示MPO可促進(jìn)巨噬細(xì)胞增殖,抑制其凋亡。MMP-9前體可由單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞分泌。已有研究發(fā)現(xiàn),MMP-9免疫染色主要集中于巨噬細(xì)胞,且在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的肩部和泡沫細(xì)胞聚集的部位中MMP-9表達(dá)及分泌增加[13]。而單核-巨噬細(xì)胞等大量的炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)是易損斑塊的特征之一,這說(shuō)明MMP-9參與了動(dòng)脈粥樣硬化疾病的進(jìn)展。而既往通過(guò)染色發(fā)現(xiàn)在破裂處存在大量MPO侵潤(rùn),提示在不穩(wěn)定斑塊中同時(shí)存在大量的MPO與MMP-9。MMP-9在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊發(fā)展中起重要作用[14-15]。TIMP-1是MMP-9的抑制劑,在斑塊不穩(wěn)定性的調(diào)節(jié)中,如小鼠的敲除或過(guò)表達(dá)的研究中發(fā)現(xiàn),TIMP-1腺病毒過(guò)表達(dá)導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化病變區(qū)域減少;腺病毒TIMP-1過(guò)表達(dá)能明顯降低頭臂動(dòng)脈斑塊的大小,由于斑塊中彈性蛋白含量增加,表明向更穩(wěn)定的斑塊表型發(fā)生了變化[16]。TIMP-1過(guò)表達(dá)可以抑制動(dòng)脈粥樣硬化病變的形成,TIMP-1過(guò)表達(dá)導(dǎo)致體內(nèi)MMPS活性顯著降低,在小鼠靜脈移植物中MMP-2、MMP-7、MMP-9、MMP-12、MMP-13其活性明顯降低[17]。更重要的是,TIMP-1的過(guò)度表達(dá)導(dǎo)致靜脈移植損傷大小減少,巨噬細(xì)胞和纖維蛋白含量減少,膠原和平滑肌細(xì)胞含量增加,最終導(dǎo)致斑塊破裂并發(fā)癥減少90%[18]。本研究結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,MPO低、中、高劑量組MMP-9 mRNA和蛋白表達(dá)升高,TIMP-1mRNA和蛋白表達(dá)降低;且隨著MPO劑量逐漸增加,MPO各劑量組MMP-9 mRNA和蛋白表達(dá)水平明顯升高,TIMP-1mRNA和蛋白表達(dá)明顯降低。這說(shuō)明,MPO可促進(jìn)巨噬細(xì)胞MMP-9 mRNA和蛋白表達(dá),抑制TIMP-1mRNA和蛋白表達(dá),進(jìn)而加重動(dòng)脈粥樣硬化病變進(jìn)展。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3142802