研究背景:急性心肌梗死是世界范圍內(nèi)死亡率最高、最危及生命的疾病之一。間充質(zhì)干細胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是治療心肌梗死最有前途的細胞類型之一,有臨床前試驗支持供體細胞越接近心臟表型修復(fù)心臟功能的療效越好。然而,無論MSCs的來源如何,移植到心梗周邊區(qū)的MSCs因心梗后惡劣環(huán)境而存活率很低,限制了MSCs在心梗治療中的應(yīng)用。轉(zhuǎn)化生長因子11（growth differentiation factor 11,GDF11）是轉(zhuǎn)化生長因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）超家族中的一員,已被證實可以在缺血/再灌注模型中刺激血管祖細胞的增殖和血管生成,可通過調(diào)控線粒體生成或線粒體動力學參與骨骼肌細胞線粒體質(zhì)量控制。而在心肌損傷治療中GDF11是否可提高心臟來源的MSCs活性及治療療效有待進一步研究。線粒體完整性的維持在細胞抵抗凋亡中起著重要的作用,線粒體功能障礙導致分裂激活和融合失活。因此我們推測缺氧條件下GDF11可能通過維持線粒體動態(tài)穩(wěn)定及完整性對MSCs起到抗凋亡保護作用。研究目的:在體內(nèi)和體外模型中驗證缺氧條件下... 

【文章來源】：浙江大學浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：135 頁

【學位級別】：博士

【部分圖文】：

MSCs的細胞形態(tài)及表面特異性標記物鑒定

浙江大學博士學位論文結(jié)果32圖2缺氧不同時間點MSCs中GDF11蛋白表達量變化通過WesternBlot檢測GDF11蛋白表達變化，β-actin作為內(nèi)參，利用ImageLab軟件分析條帶灰度值進行統(tǒng)計定量分析(n=3)。數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差表示。*p＜0.05，與缺氧0小時相比。4.2體內(nèi)動物模型實驗4.2.1GDF11改善了心肌梗死周邊區(qū)MSCs的抗凋亡能力我們通過過表達GDF11的慢病毒感染MSCs（MSCsLV-GDF11），同時將空載質(zhì)粒病毒感染的MSCs（MSCsLV）作為對照組。慢病毒過表達GDF11基因感染MSCs48小時后，提取細胞總蛋白，通過WesternBlot檢測證實，與空載病毒組相比，在過表達GDF11組的GDF11蛋白水平明顯上調(diào)（圖3A）。C57/BL6J小鼠構(gòu)建心肌梗死模型后，在心梗周邊區(qū)移植相同數(shù)量的MSCsLV-GDF11和MSCsLV（細胞數(shù)5×105/只）。術(shù)后3天取心臟組織提取RNA及行冰凍切片。熒光定量PCR及GFP免疫熒光染色觀察到MSCsLV-GDF11組心梗周邊區(qū)MSCs的駐留率更高（圖3B-D）。

浙江大學博士學位論文結(jié)果33圖3GDF11增強小鼠心梗模型中移植后的MSCs的駐留率。（A）慢病毒過表達GDF11基因感染MSCs48小時后，提取細胞總蛋白，Westernblot檢測GDF11蛋白水平變化及統(tǒng)計分析，空載質(zhì)粒病毒組（LV）作為對照組，β-actin作為內(nèi)參。利用ImageLab軟件分析條帶灰度值進行統(tǒng)計定量分析(n=3)。（B）熒光定量PCR分析梗死心臟中GFP陽性細胞比例，兩組各統(tǒng)計6只小鼠。（C，D）代表性GFP免疫熒光染色（C），藍色代表細胞核，綠色代表GFP標記的MSCs。定量分析每個視野下GFP陽性的細胞個數(shù)（D），每個心臟切面至少觀察9-10個視野，兩組各統(tǒng)計6只小鼠樣本。比例尺長度為100μm。數(shù)據(jù)以平均值±標準差表示，*p＜0.05，與LV/MSCsLV組相比。4.2.2移植過表達GDF11的MSCs可改善心肌梗死后心臟功能為了研究過表達GDF11的MSCs對心肌梗死后心臟功能的影響，構(gòu)建小鼠心梗模型后，我們在心肌梗死周邊區(qū)隨機選取5處注射MSCs，包括慢病毒過表達GDF11的MSCs（MSCsLV-GDF11）和作為對照組的空載質(zhì)粒病毒轉(zhuǎn)染的MSCs（MSCsLV）。同時注射相同體積的DMEM作為陰性對照組。在小鼠術(shù)前1天，心梗后3、7、14、28天，利用經(jīng)胸多普勒心臟超聲檢查評估各組小鼠心功能參數(shù)左

【參考文獻】：
期刊論文
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[3]WJSC 6th Anniversary Special Issues（2）:Mesenchymal stem cells Umbilical cord-derived mesenchymal stem cells:Their advantages and potential clinical utility[J]. Tokiko Nagamura-Inoue,Haiping He.  World Journal of Stem Cells. 2014(02)



本文編號：3137306