目的：應(yīng)用分子生物學(xué)的方法,在細(xì)胞水平觀察促紅細(xì)胞生成素（erythropoietinEPO）對(duì)高糖環(huán)境誘導(dǎo)下體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞（Cardiomyocytes CM）的影響。方法：1、分離培養(yǎng)新生乳鼠心肌細(xì)胞并鑒定：①分離培養(yǎng)新生乳鼠心肌細(xì)胞并鑒定：取新生乳鼠心室肌組織后,以0.1%胰蛋白酶及0.5g/LⅡ型膠原蛋白酶復(fù)合消化分離心肌細(xì)胞,差速貼壁45min分離純化心肌細(xì)胞,加入100μmol/L Brdu抑制非心肌細(xì)胞的生長以提高心肌細(xì)胞純度。②觀察培養(yǎng)心肌細(xì)胞的活性：電子顯微鏡下觀察細(xì)胞,可見細(xì)胞規(guī)律搏動(dòng)即心肌細(xì)胞活性好。③進(jìn)行細(xì)胞鑒定：心肌細(xì)胞爬片用明膠或?qū)诱尺B蛋白包被的細(xì)胞爬片進(jìn)行,細(xì)胞爬片后用免疫組化SABC法進(jìn)行鑒定,免疫組化結(jié)果應(yīng)為:a-actin陽性,證實(shí)為心肌細(xì)胞（CM）。2、取分離培養(yǎng)的心肌細(xì)胞隨機(jī)分為：①對(duì)照組：5.5mmol/L葡萄糖；②高糖組：25mmol/L葡萄糖；③EPO+高糖組：20u/mlEPO+25mmol/L葡萄糖,72h后行下一步實(shí)驗(yàn)。3、心肌細(xì)胞肥大的檢測：軟件計(jì)算心肌細(xì)胞表面積,濃度。4、[3H]-亮氨酸滲入測,5、心肌細(xì)胞β-MHC m... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)云南省

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

心肌細(xì)胞3H-leu滲入量


本文編號(hào)：3122851