目的:用過表達Islet-1基因的慢病毒感染小鼠間充質(zhì)干細胞C3H10T1/2并誘導其向心肌樣細胞的特異分化。通過檢測激活或抑制Akt活性的情況下,Islet-1與GCN5蛋白質(zhì)結(jié)合量的變化情況,研究在此過程中Akt與Islet-1/GCN5蛋白質(zhì)復合體的關(guān)系,以此深入探討間充質(zhì)干細胞特異性誘導分化為心肌樣細胞的調(diào)控機制。方法:1.將生長狀況良好的間充質(zhì)干細胞C3H10T1/2以5×10⁴個/瓶的密度鋪在專用細胞培養(yǎng)瓶中,待細胞匯合度為20³0%時用攜帶GFP或Islet-1基因的慢病毒感染細胞。96h后流式細胞術(shù)檢測細胞感染效率;Western blot、細胞免疫熒光檢測感染后細胞Islet-1、cTnT和Cx43蛋白質(zhì)水平及定位;倒置顯微鏡、熒光顯微鏡觀察感染后細胞形態(tài)學方面的變化;qRT-PCR技術(shù)檢測心肌特異性基因GATA4、Nkx2.5、Mef2c mRNA時序性改變情況。2.分別利用Akt激活劑IGF-1、Akt特異性抑制劑MK-2206作用Islet-1慢病毒感染后的細胞,CCK-8法檢測加入IGF-1后對病毒感染后細胞活力的影... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學重慶市

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

熒光顯微鏡觀察熒光蛋白GFP的表達情況(*100)

流式細胞儀檢測各組Islet-1慢病毒的感染效率

WesternBlot檢測各組細胞Islet-1蛋白質(zhì)水平Fig.3TheproteinlevelsofIslet-1byWesternBlot

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3084641