背景心血管及血栓性疾病仍然是世界上發(fā)病與死亡的主要原因。在這些疾病中,凝血酶作為一種多功能的絲氨酸蛋白水解酶在凝血級(jí)聯(lián)中發(fā)揮著關(guān)鍵作用,主要是將可溶的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為難溶的纖維蛋白。目前,抑制凝血酶已經(jīng)成為治療心血管及血栓性疾病的一種有效策略。方法本文采用凝血酶特異性熒光探針Z-GGRAMC乙酸鹽作為底物構(gòu)建人凝血酶抑制劑體外篩選模型,在體外進(jìn)行中藥化合物高通量的篩選實(shí)驗(yàn)（52種）。試圖從中發(fā)現(xiàn)抑制潛能較強(qiáng)的化合物,并選取抑制潛能最強(qiáng)的化合物（金絲桃素）,詳細(xì)探究其抑制動(dòng)力學(xué)及分子對(duì)接模擬機(jī)制。金絲桃素是圣約翰草的主要活性成分之一,為進(jìn)一步分析探究其對(duì)人凝血酶的作用及其機(jī)制,收集了圣約翰草提取物及其來源的20種商業(yè)化主要活性成分,以黃芩素作為陽性對(duì)照。采用基于熒光的生物化學(xué)方法仔細(xì)研究了圣約翰草提取物及其主要天然成分對(duì)人凝血酶的抑制作用。結(jié)果體外初篩表明橙黃決明素等15種化合物可能具有凝血酶抑制潛力（抑制劑濃度為100μM時(shí),凝血酶的殘余活性低于50%）。對(duì)這15種化合物進(jìn)行劑量-抑制曲線分析并比較,結(jié)果顯示金絲桃素具有最強(qiáng)的人凝血酶抑制能力。以圣約翰草為模式的進(jìn)一步結(jié)果表明,圣約翰草... 

【文章來源】：鄭州大學(xué)河南省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：60 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

與凝血酶孵育30min后Z-GGRAMC乙酸鹽（50μM）的熒光強(qiáng)度隨酶濃度的線性變化，激發(fā)為380nm

-GGRAMC 乙酸鹽(50 μM)分別與凝血酶 (0.1 NIH/mL)孵育不同時(shí)間度隨反應(yīng)時(shí)間的線性變化。激發(fā)為 380 nm。力學(xué)分析及最佳底物濃度的確定 1.3 所示，先前優(yōu)化實(shí)驗(yàn)已經(jīng)保證本實(shí)驗(yàn)所采用的反應(yīng)時(shí)間均在線性反應(yīng)區(qū)間內(nèi)。表觀動(dòng)力學(xué)常數(shù) Vmax和 Km通過公式數(shù)據(jù)進(jìn)行非線性擬合而成，并采用 Eadie-Hofstee (v-v/[S]C 乙酸鹽代謝產(chǎn)物生成的動(dòng)力學(xué)行為符合經(jīng)典的米氏動(dòng)力擬合求解動(dòng)力學(xué)參數(shù)，求得 Vmax=25.93±1.23 μmol/min/NIH±15.63 uM。選擇底物濃度接近 Km值，本試驗(yàn)選擇底物濃

RAMC 乙酸鹽(50 μM)分別與凝血酶 (0.1 NIH/mL)孵育不同時(shí)間后度隨反應(yīng)時(shí)間的線性變化。激發(fā)為 380 nm。學(xué)分析及最佳底物濃度的確定.3 所示，先前優(yōu)化實(shí)驗(yàn)已經(jīng)保證本實(shí)驗(yàn)所采用的反應(yīng)時(shí)間以線性反應(yīng)區(qū)間內(nèi)。表觀動(dòng)力學(xué)常數(shù) Vmax和 Km通過公式 1-據(jù)進(jìn)行非線性擬合而成，并采用 Eadie-Hofstee (v-v/[S])作 乙酸鹽代謝產(chǎn)物生成的動(dòng)力學(xué)行為符合經(jīng)典的米氏動(dòng)力學(xué)求解動(dòng)力學(xué)參數(shù)，求得 Vmax=25.93±1.23 μmol/min/NIH-T15.63 uM。選擇底物濃度接近 Km值，本試驗(yàn)選擇底物濃度


本文編號(hào)：3051670