動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展過程中,均有不同程度的炎癥反應的發(fā)生,內皮細胞含有并釋放促進組織損傷的炎癥分子。在炎癥環(huán)境下,由低氧環(huán)境發(fā)生的無氧糖酵解導致乳酸的積累,進而導致病變區(qū)域pH的降低,這預示著酸性環(huán)境對動脈硬化的發(fā)生可能有重要的作用；溶血磷脂酰膽堿（LPC）是磷脂酰膽堿的衍生物,由磷脂酶A2（PLA2）催化磷脂酰膽堿（PC）的水解生成,LPC是氧化性低密度脂蛋白ox-LDL的主要成分,因此LPC在動脈硬化部位是高濃度的。研究表明,內皮細胞中GPR4是一類重要的雙配體受體,在酸性環(huán)境中有重要的作用,如促進粘附分子表達,炎癥因子表達等。GPR4作為雙配體受體在內皮細胞誘導炎癥因子表達的調控作用的分子機理仍然不明。本研究首次闡述了質子感知受體GPR4在內皮細胞炎癥因子表達過程中的一種新現象,這為能更好的理解動脈硬化的致病機理,為治療動脈硬化也可能提供潛在靶點。目的：研究質子感知受體GPR4的活化對白細胞介素6（Interleukin-6,IL-6）、腫瘤壞死因子-α（Tumor Necrosis Factor, TNF-a）基因表達的調控作用及受體介導的信號通路,并探討在動脈粥樣硬化中的作... 

【文章來源】：內蒙古大學內蒙古自治區(qū) 211工程院校

【文章頁數】：76 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
目錄
英文縮略詞表
一 引言
二 材料與方法
    2.1 主要儀器設備
    2.2 主要試劑及實驗材料
    2.3 主要試劑的配制
    2.4 GPR4 cDNA的克隆與表達載體的構建
    2.5 人質子感知受體GPR4基因真核表達載體的構建
    2.6 GPR4基因干擾表達載體的篩選
    2.7 RT-PCR測定內皮細胞中四種質子感知受體mRNA表達
    2.8 過表達GPR4基因的HUVEC細胞及GPR4基因干擾的HUVEC細胞的建立
    2.9 LPC及酸性pH對GPR4誘導的炎癥因子表達的檢測
三 結果與分析
    3.1 人質子感知受體GPR4 cDNA的克隆與克隆載體構建
        3.1.1 人質子感知受體GPR4 cDNA的PCR擴增
        3.1.2 重組質粒pCR2.1-GPR4的雙酶切鑒定
        3.1.3 重組質粒pCR2.1-GPR4的測序鑒定
    3.2 人質子感知受體GPR4基因真核表達載體的構建
        3.2.1 載體構建示意圖
        3.2.2 重組表達載體pIRES-EGFP-GPR4雙酶切鑒定
        3.2.3 重組質粒pIRES-EGFP-GPR4的測序鑒定
    3.3 HUVEC的形態(tài)生物學特征及生長曲線
        3.3.1 正常培養(yǎng)的HUVEC細胞圖
        3.3.2 HUVEC細胞生長曲線的繪制
    3.4 HUVEC細胞中四種質子感知受體mRNA表達
    3.5 過表達GPR4基因的HUVEC細胞的建立
        3.5.1 顯微熒光照相
        3.5.2 熒光定量PCR相對定量結果
    3.6 GPR4基因干擾的HUVEC細胞的建立
        3.6.1 GPR4干擾載體轉染HUVEC顯微熒光照相
        3.6.2 熒光定量PCR相對定量結果
    3.7 ELISA檢測IL-6,TNF-α的表達
        3.7.1 IL-6標準曲線
        3.7.2 TNF-α標準曲線
        3.7.3 ELISA檢測IL-6、TNF-α的表達
    3.8 PTX對pH6.8通過GPR4誘導的IL-6,TNF-α的表達沒有影響
    3.9 NF-κB信號通路參與pH6.8通過GPR4誘導的IL-6,TNF-α的表達過程
四 討論
五 結論
附錄一
附錄二
參考文獻
文獻綜述
    參考文獻
致謝
攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文與參與的科研項目



本文編號：3023466