目的支架治療冠狀動脈粥樣硬化性心臟病是目前常用的方式,但植入支架引發(fā)血管壁損傷,內(nèi)皮功能障礙,血管平滑肌細胞高度分化,血管平滑肌細胞（Vascular Smooth Muscle Cells）異常的增殖和遷移是導(dǎo)致動脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）和支架再狹窄（In-stent stenosis,IRS）發(fā)生的重要因素;本研究旨在探究miR-378a-5p在調(diào)節(jié)血管平滑肌細胞功能的作用和分子機制。方法（1）載脂蛋白E缺失型小鼠（Apolipoprotein E,ApoE-/-）給予高脂喂養(yǎng)構(gòu)建動脈粥樣硬化模型組,健康基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)的C57BL/6J小鼠構(gòu)建對照組,獲取兩組小鼠的心臟血,應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）測定兩組中miR-378a-5p表達;（2）獲取臨床支架再狹窄患者和健康個體臨床血樣,應(yīng)用RT-PCR測定兩個組中miR-378a-5p的表達;（3）培養(yǎng)人血管平滑肌細胞,使用瞬時轉(zhuǎn)染技術(shù),lipo2000轉(zhuǎn)染試劑將miR-378a-5p的過表達物及抑制物... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數(shù)】：54 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

miR-378a-5p在PDGF-BB刺激下在對細胞遷移的影響

NC：轉(zhuǎn)染了無關(guān)序列（Negative control，NC）組 miR-378a-5p：轉(zhuǎn)染達物組 miR-378a-5p inhibitor：轉(zhuǎn)染了 miR-378a-5p 抑制圖 5 MiR-378a-5p 對血管平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)換蛋白的影3. MiR-378a-5p 作用機制探究3.1 預(yù)測 miRNA-378a-5p 的下游靶標 CDK1在 CDK1 的 3'UTR 中存在 miR-378a-5p 的潛在種子序列見圖miR-378a-5p 的下游靶標，我們用生物信息學的方法預(yù)測了 miR有相互作用（http://www.targetscan.org/vert_72/），CDK1 可能是 miR中的作用靶標。

青島大學碩士學位論文3.2 驗證 CDK1 是 miR-378a-5p 的下游靶標查文獻得到 P21 是已被證實的 CDK1 的作用靶標之一，為了明確 miR-378a-5p的作用通路，我們用 PDGF-BB 刺激細胞，通過 RT-PCR 檢測發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染了 miR-378a-5pmimic 的細胞 CDK1 的表達明顯降低，見圖 7A；在 PDGF-BB 刺激后，檢測 CDK1mRNA 和蛋白表達水平及 p21 蛋白水平的表達，發(fā)現(xiàn) miR-378a-5p mimic 轉(zhuǎn)染的細胞中 CDK1 和 p21 的表達下降，而抑制了 miR-378a-5p 的表達后，CDK1 和 P21 的表達增加，見圖 7B 和 7C；在免疫熒光實驗中，熒光標記的細胞核（藍色）和 CDK1（綠色）被共定位于細胞上，miR-378a-5p mimic 轉(zhuǎn)染的 VSMC 中 CDK1 表達減低，而 miR-378a-5p inhibitor 組結(jié)果相反，熒光強度增強，見圖 7D；RIP 實驗示：表達miR-378a-5p 的質(zhì)粒富集 CDK1 的效率比不表達 miR-378a-5p 組明顯提高，見圖 7E。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Treatment of coronary in-stent restenosis:a systematic review[J]. Leos Pleva,Pavel Kukla,Ota Hlinomaz.  Journal of Geriatric Cardiology. 2018 (02)
[2]miRNA與動脈粥樣硬化研究進展[J]. 張和細,龔輝.  中華實用診斷與治療雜志. 2014(01)

博士論文
[1]富氫鹽水通過失活Ras-ERK1/2-MEK1/2和Akt通路及抑制ROS減輕血管平滑肌細胞的增殖及大鼠頸動脈球囊損傷后新生內(nèi)膜的增生[D]. 陳亞麗.河北醫(yī)科大學 2013



本文編號：3015843