研究目的:細胞凋亡在缺血性心臟病的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著非常重要的作用,心肌細胞凋亡是導致心梗后心衰和預后的重要因素。整合素β3在心肌細胞增殖和凋亡的雙向調(diào)控中發(fā)揮重要作用,但其在缺氧誘導的心肌細胞凋亡中作用不清,有待進一步闡明,本研究通過探索整合素β3在缺氧誘導的心肌細胞凋亡中的作用,為今后的心肌細胞凋亡干預治療提供新的有效的靶點。研究方法:用氯化鈷（Co Cl2）或缺氧培養(yǎng)箱培養(yǎng)（1%O2）處理大鼠H9C2心肌細胞和大鼠原代心肌細胞,模擬心肌細胞缺氧微環(huán)境。采用Western blot和實時熒光PCR檢測缺氧對心肌細胞內(nèi)整合素β3蛋白質(zhì)及m RNA表達的改變。TUNEL法及Annexin V流式細胞術檢測心肌細胞凋亡。通過冠狀動脈結扎復制大鼠急性心梗（AMI）模型,免疫組化法檢測整合素β3和HIF1α的表達。研究結果:氯化鈷（Co Cl2）或缺氧培養(yǎng)（1%O2）能誘導H9C2細胞缺氧微環(huán)境,缺氧可明顯抑制H9C2心肌細胞增殖,具有時間和劑量依賴性。缺氧并誘導H9C2心肌細胞凋亡。低氧條件下心肌細胞中整合素β3和HIF1-α的表達上調(diào)。干擾整合素β3表達可誘導心肌細胞凋亡,并能促進缺氧誘導... 

【文章來源】：上海交通大學上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

缺氧抑制H9C2心肌細胞增殖并誘導細胞凋亡

上海交通大學碩士學位論文法和流式細胞術檢測缺氧對心肌細胞凋亡的影響，TUNEL 結果顯示，氯化鈷（900μM）或低氧微環(huán)境（1％O ）處理 H9C2 心肌細胞 24 小時，H9C2 心肌細胞凋亡水平上升，與對照組相比具有統(tǒng)計學意義（p < 0.01，圖 1D）。流式細胞術的結果也證實了這個結果（圖 1E）。因此，這些結果表明，缺氧微環(huán)境均可以抑制心肌細胞增殖并誘導細胞凋亡。

detected by real-time PCR in H9C2 cells treated with cobalt chloride for 12 h. (B) Integrin β3 protein expredetected by western blotting in H9C2 cells treated with cobalt chloride for 12 h. (C) Integrin β3 mRNA expredetected by real-time PCR in H9C2 cells treated with cobalt chloride for different times. (D) Integrin βexpression was detected by western blotting in H9C2 cells treated with cobalt chloride for different time Integrin β3 mRNA expression was detected by real-time PCR in H9C2 cells subjected to a hypoxic microenviroO2) for different times. (F) Integrin β3 protein expression was detected by western blotting in H9C2 cells subjhypoxic microenvironment (1% O2) for different times. **P<0.01.3.3 缺氧微環(huán)境誘導大鼠原代心肌細胞凋亡并促進整合素 β3 表達為了進一步證實缺氧對心肌細胞整合素β3 表達的影響，我們分離、培養(yǎng)鼠原代心肌細胞。利用氯化鈷誘導的化學性細胞缺氧模型分析缺氧對大鼠原細胞的影響。實驗的結果顯示，氯化鈷同樣也可以誘導原代心肌細胞整合素HIF1α的表達上調(diào)，具有明顯的時間依賴性（圖 3A）。TUNEL 實驗結果也顯心肌細胞凋亡率在化學性細胞缺氧微環(huán)境中顯著增加，具有統(tǒng)計學意義（p < 3B）。因此，所以的這些結果說明缺氧誘導心肌細胞凋亡的過程中整合素β3 顯著增加，提示整合素β3 在心肌細胞凋亡的過程中發(fā)揮重要的作用。


本文編號：2954828