目的:糖尿病導(dǎo)致心房顫動(dòng)（房顫）發(fā)生的機(jī)制尚未完全闡明,我們的前期研究提示氧化應(yīng)激和炎癥在糖尿病心房重構(gòu)中發(fā)揮重要作用,PPAR-γ激動(dòng)劑吡格列酮通過(guò)抗氧化抗炎作用減緩糖尿病心房結(jié)構(gòu)重構(gòu)和電重構(gòu)。線粒體是絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物機(jī)體內(nèi)活性氧（ROS）的主要來(lái)源,本研究擬進(jìn)一步評(píng)價(jià)線粒體氧化應(yīng)激及穩(wěn)態(tài)重構(gòu)在糖尿病心房重構(gòu)中的作用及吡格列酮的干預(yù)機(jī)制。方法:動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中將健康成年日本白兔隨機(jī)分為正常對(duì)照組（C組）、糖尿病組（DM組）、糖尿病+吡格列酮藥物治療組（Pio組,4 mg/kg/天）。通過(guò)靜脈注射四氧嘧啶建立兔1型糖尿病模型,模型建成8周后進(jìn)行實(shí)驗(yàn)檢測(cè)。通過(guò)心臟超聲檢測(cè)心臟結(jié)構(gòu)和功能,通過(guò)HE染色測(cè)定左房肌細(xì)胞橫截面積,通過(guò)馬松染色測(cè)定左房間質(zhì)纖維化程度,通過(guò)免疫組化和Western blot檢測(cè)分析左房交感神經(jīng)重構(gòu)相關(guān)蛋白的分布和表達(dá)。檢測(cè)各組家兔體表心電圖及血流動(dòng)力學(xué)變化,通過(guò)Langendofff灌流的離體心臟電生理實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)心臟傳導(dǎo)功能并評(píng)價(jià)房顫誘發(fā)率。通過(guò)共聚焦顯微鏡在1Hz場(chǎng)刺激下檢測(cè)分離的兔心房肌細(xì)胞內(nèi)鈣瞬態(tài)（CaT）。應(yīng)用電鏡觀察線粒體形態(tài),并檢測(cè)線粒體ROS生成速率、呼吸控制... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：116 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

動(dòng)物模型建立及分組

天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文10圖 2.1 三組動(dòng)物超聲心動(dòng)圖樣圖2.1.4 血流動(dòng)力學(xué)及體表心電圖參數(shù)檢測(cè)所有動(dòng)物經(jīng) 3%戊巴比妥鈉充分麻醉后，使用繩索固定四肢及頭部使其平臥于手術(shù)臺(tái)，連接體表心電圖記錄 1 min，打開(kāi)壓力換能器并調(diào)零。隨后剃去頸部體毛，使用手術(shù)剪沿頸部正中逐漸剪開(kāi)皮膚及肌肉，過(guò)程中小心避讓血管，充分暴露出氣管后，用止血鉗夾閉并向兩側(cè)分開(kāi)氣管周圍肌肉，隨后找到右側(cè)頸總動(dòng)脈，鈍性分離出約 2 cm 長(zhǎng)度，使用縫合線結(jié)扎遠(yuǎn)心端并用動(dòng)脈夾夾閉近心端。隨后，用小手術(shù)剪于游離的頸總動(dòng)脈上剪開(kāi)一小口，緩慢插入連接壓力換能器的壓力導(dǎo)管（提前充滿 500 U/ml 肝素鹽水的手術(shù)用腰麻管），使用縫線打一個(gè)活結(jié)結(jié)扎插入壓力導(dǎo)管的血管壁，松開(kāi)動(dòng)脈夾測(cè)定動(dòng)脈內(nèi)壓。待壓力曲線穩(wěn)定后，記錄主動(dòng)脈收縮壓（SDP）、舒張壓（DBP）和平均動(dòng)脈壓（MBP）。動(dòng)脈內(nèi)壓記錄完成后，緩慢向心室腔內(nèi)推送壓力導(dǎo)管，直至壓力曲線呈現(xiàn)出正弦波樣，提示導(dǎo)管末端已經(jīng)過(guò)主動(dòng)脈瓣進(jìn)入左心室。待壓力曲線穩(wěn)定后，記錄左室舒張末壓（LVEDP）、左室壓

圖 2.2 血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)中壓力導(dǎo)管由主動(dòng)脈進(jìn)入左心室過(guò)程2.1.5 心臟重量測(cè)量及組織標(biāo)本留取完成血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)后，退出壓力導(dǎo)管，結(jié)扎右側(cè)頸總動(dòng)脈。在留取動(dòng)物血液樣本后（見(jiàn) 1.1.4 血清標(biāo)本留取及胰島素檢測(cè)），用手術(shù)剪經(jīng)劍突沿胸骨正中剖開(kāi)胸腔，迅速離斷動(dòng)靜脈取出心臟，置入 4 ℃ PBS 溶液中充分洗凈去除心腔內(nèi)殘留血液，用濾紙吸干后置于冰板上解剖心臟，去除多余組織，在電子天平上分別稱量全心、心房和心室重量。心臟重量稱取完畢后，取一小塊左心房組織置于滴有 2.5%戊二醛固定液的載玻片上，用一次性石蠟刀片取 2 塊約1×1×2mm 大小的長(zhǎng)條形標(biāo)本儲(chǔ)存于 2.5%戊二醛中，避光保存，用于后續(xù)電鏡檢測(cè)。隨后取部分左心房組織，固定于 4%的多聚甲醛中，用于后續(xù)病理學(xué)檢查。最后取 2 塊約 100 mg 的左心房組織置于 1.5 ml 組織凍存管內(nèi)，立即放入-196 ℃液氮中使其迅速冷凍，取材完畢后放入-80 ℃冰箱凍存，用于后續(xù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。2.1.6 病理學(xué)及免疫組織化學(xué)檢查

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]吡格列酮抑制心房肌細(xì)胞腫脹激活性氯電流通道重構(gòu)的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 宋芝萍,顧俊,胡偉,劉旭.  國(guó)際心血管病雜志. 2015(01)
[2]吡格列酮抑制糖尿病兔心房肌細(xì)胞離子通道重構(gòu)[J]. 劉長(zhǎng)樂(lè),李廣平,富華穎,李健,程立君,楊萬(wàn)松,劉彤.  中華急診醫(yī)學(xué)雜志. 2014 (02)
[3]吡格列酮對(duì)糖尿病兔心房重構(gòu)的影響和機(jī)制研究[J]. 劉長(zhǎng)樂(lè),李廣平,富華穎,李健,程立君,王興華,楊萬(wàn)松,劉彤.  中華心律失常學(xué)雜志. 2013 (03)



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