研究背景腹主動(dòng)脈瘤(Abdominal aortic aneurysm,AAA)是一種具有高致死危險(xiǎn)的腹主動(dòng)脈局部擴(kuò)張性疾病,一旦瘤體破裂,患者死亡率超過80%�，F(xiàn)今動(dòng)脈瘤的患病率仍在持續(xù)上升,但其形成機(jī)制仍不清楚;目前主要治療手段以外科手術(shù)為主,內(nèi)科藥物干預(yù)方法非常有限。研究發(fā)現(xiàn),中膜平滑肌細(xì)胞數(shù)目的減少及其收縮功能的降低,是瘤體形成過程中的重要病理機(jī)制。然而,上述分子調(diào)節(jié)機(jī)制及可能的干預(yù)靶點(diǎn)仍有待進(jìn)一步闡明。我們的前期臨床研究結(jié)果提示乙醛脫氫酶2(Aldehyde dehydrogenase 2,ALDH2)與動(dòng)脈瘤的發(fā)生發(fā)展關(guān)系十分密切,可影響血管平滑肌細(xì)胞的表型轉(zhuǎn)化,在此基礎(chǔ)上,我們進(jìn)一步利用動(dòng)脈瘤動(dòng)物模型,深入研究了ALDH2影響動(dòng)脈瘤發(fā)生發(fā)展的病理機(jī)制及干預(yù)靶點(diǎn)。研究目的(1)探討ALDH2是否影響ApoE-/-小鼠腹主動(dòng)脈瘤的發(fā)生和發(fā)展(2)探討ALDH2影響腹主動(dòng)脈瘤發(fā)生發(fā)展的相關(guān)分子機(jī)制(3)研究影響動(dòng)脈瘤發(fā)生的潛在干預(yù)措施研究方法一、體內(nèi)(動(dòng)物學(xué))實(shí)驗(yàn)1.建立ApoE-/-小鼠腹主動(dòng)脈瘤模型:將血管緊張素Ⅱ(Angiotensin Ⅱ,ANGⅡ,1.44 mg/kg/d)溶于生理鹽水(Normal saline,NS)裝入滲透泵中并埋入ApoE-/-小鼠體內(nèi),持續(xù)泵入28天后建立AAA小鼠模型。2.ALDH2的干預(yù)措施:腹腔注射ALDH2特異性抑制劑(Daidzin,75 mg/kg/d),小鼠隨機(jī)分組:DMSO假手術(shù)組;Daidzin假手術(shù)組;ANGⅡ+DMSO 組;ANGⅡ+Daidzin 組;3.建立心肌素(myocardin,Myocd)干擾小鼠腹主動(dòng)脈瘤模型(1)尾靜脈注射攜帶有Myocd-shRNA或空載體的腺相關(guān)病毒亞型2(Adeno-associated virus2,AAV2),構(gòu)建Myocd干擾或?qū)φ招∈竽Ｐ?蛋白印跡法檢測(cè)小鼠血管組織中的Myocd水平;(2)按照上述方法構(gòu)建小鼠腹主動(dòng)脈瘤模型,應(yīng)用ApoE-/-小鼠,及雙敲小鼠(ALDH2-/-ApoE-/-Double knock out,DKO),分組為:ApoE-/-+NC組,ApoE-/-+shRNA組,DKO+shRNA組;4.利用小鼠超聲成像技術(shù)檢測(cè)各組小鼠腹主動(dòng)脈直徑;5.VG染色檢測(cè)小鼠血管彈力纖維變化;6.HE染色觀察小鼠血管大體形態(tài)變化;7.利用RT-PCR和蛋白印跡法檢測(cè)小鼠血管平滑肌細(xì)胞標(biāo)志蛋白及Myocd表達(dá);8.免疫組織化學(xué)法檢測(cè)小鼠血管平滑肌細(xì)胞標(biāo)志蛋白α平滑肌肌動(dòng)蛋白(Alpha smooth muscle actin,α-SMA)、平滑肌22α(smooth muscle 22 alpha,SM22α)變化;二、體外(細(xì)胞學(xué))實(shí)驗(yàn)1.人原代平滑肌細(xì)胞給予ANGⅡ刺激,同時(shí)給予Daidzin干預(yù),分組為NS+DMSO組,AGNⅡ+DMSO組,ANGⅡ+Daidzin組;2.ALDH2野生型小鼠主動(dòng)脈提取原代血管平滑肌細(xì)胞并給予ANGⅡ刺激,同時(shí)給予miR-31-5p Mimic干預(yù),分組為DMSO+Mimic組,Daidzin+Mimic組,DMSO+Mimic nc組,Daidzin+Mimic nc組;3.ALDH2野生型和ALDH2敲除(Knock out,KO)小鼠主動(dòng)脈提取原代血管平滑肌細(xì)胞并給予ANGⅡ刺激,對(duì)照組給予生理鹽水(Normal saline,NS),分組為WT+NS組,KO+NS組,WT+ANGⅡ組,KO+ANGⅡ組;4.利用RT-PCR與蛋白印跡法分別檢測(cè)小鼠血管平滑肌細(xì)胞標(biāo)志蛋白及心肌素表達(dá)情況;研究結(jié)果1.抑制乙醛脫氫酶2活性可以減少腹主動(dòng)脈瘤的發(fā)生;2.抑制乙醛脫氫酶2活性可通過增加心肌素的表達(dá)水平維持平滑肌細(xì)胞的收縮功能;3.乙醛脫氫酶2可通過miR-31-5p影響心肌素的表達(dá)進(jìn)而影響平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化和AAA的發(fā)生。研究結(jié)論ALDH2在腹主動(dòng)脈瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。抑制ALDH2的活性通過抑制miR-31-5p增加心肌素的表達(dá)調(diào)節(jié)血管平滑肌細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化,抑制平滑肌細(xì)胞受到AngⅡ刺激后向分泌型轉(zhuǎn)化,維持血管的收縮性和完整性,從而減少腹主動(dòng)脈瘤的發(fā)生發(fā)展。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R543.1
【部分圖文】：

圖１．抑制乙酸脫氫酶２活性可以減輕血管緊張素２導(dǎo)致的血管擴(kuò)張??（Ａ、Ｂ）利用小鼠無創(chuàng)血壓計(jì)測(cè)量小鼠放泵前安靜時(shí)血壓，各組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差??異；（Ｃ）利用小動(dòng)物超聲儀測(cè)量小鼠放泵前腹主動(dòng)脈直徑，各組沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差??異；（Ｄ、Ｅ）利用小鼠無創(chuàng)血壓計(jì)測(cè)量小鼠放泵后２８天安靜時(shí)血壓［＊Ｐ＜０．０５ｖｓ．??ＮＳ＋ＤＭＳＯ，?＾＜０．０５?ｖｓ．?ＮＳ＋Ｄａｉｄｚｉｎ］；?（Ｆ）利用小動(dòng)物超聲儀測(cè)量小鼠放泵后??２８?天腹主動(dòng)脈直徑［＊尸＜０．０５?ｖｓ．?ＮＳ＋ＤＭＳＯ，?＃尸＜０．０５?ｖｓ．?Ａｎｇｌｌ＋ＤＭＳＯ］。??

圖２．抑制乙醛脫氣酶２活性可以減少腹主動(dòng)脈瘤的發(fā)生率??（Ａ）相機(jī)拍攝小鼠血管大體圖片，紅色突出處為瘤體；（Ｂ）小鼠腹主動(dòng)脈瘤統(tǒng)??計(jì)ＮＳ＋ＤＭＳＯ組?０％，?ＮＳ＋Ｄａｉｄｚｉｎ組?０％，?Ａｎｇｌｌ＋ＤＭＳＯ組?６３．３％，Ａｎｇｌｌ＋Ｄａｉｄｚｉｎ??組４０％；?（Ｃ）?ＨＥ染色觀察小鼠血管病理變化，藍(lán)色為胞核，紅色為細(xì)胞質(zhì)（放??大倍數(shù)：４倍，標(biāo)尺：５００?ｐＭ）；?ＶＧ染色小鼠血管病理變化，黑色為彈力纖維，??紅色為細(xì)胞質(zhì)（放大倍數(shù)：４０倍，標(biāo)尺：５０?ｐＭ）；?（Ｄ）彈力纖維降解評(píng)分評(píng)價(jià)??彈力纖維情況［＊Ｐ＜０．０５?ｖｓ．?ＮＳ＋ＤＭＳＯ，＃Ｐ＜０．０５?ｖｓ．?Ａｎｇｌｌ＋ＤＭＳＯ］。??

圖３．抑制乙醒脫氫酶２活性可減少腹主動(dòng)脈瘤形成中平滑肌細(xì)胞的??表型轉(zhuǎn)化??（Ａ）免疫組化染色法檢測(cè)血管組織ａ－ＳＭＡ的表達(dá)及分布，棕色代表ａ－ＳＭＡ，??藍(lán)色代表細(xì)胞核；（Ｂ）免疫組化染色法檢測(cè)血管組織ＳＭ２２ａ的表達(dá)及分布，棕??色代表ＳＭ２２ａ，藍(lán)色代表細(xì)胞核（放大倍數(shù)：４０倍，標(biāo)尺：５（＾ｉＭ）；?（Ｃ）ＲＴ－ＰＣＲ??評(píng)價(jià)血管組織?Ｍｙｏｃｄ?表達(dá)情況［＊Ｐ?＜?０．０５?ｖｓ．?ＮＳ＋ＤＭＳ０，＃Ｐ?＜?０．０５?ｖｓ．??ＡｎｇＩＩ＋ＤＭＳＯ］；?（Ｄ）?ＲＴ－ＰＣＲ評(píng)價(jià)血管組織ａ－ＳＭＡ表達(dá)情況［＃Ｐ＜０．０５?ｖｓ．??Ａｎｇｌｌ＋ＤＭＳＯ］。??
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