目的通過觀察大鼠主動脈球囊損傷后血管內(nèi)膜增生過程中Apelin的表達變化及應用纈沙坦治療后對其表達的影響,探討纈沙坦在預防經(jīng)皮冠狀動脈介入治療(PCI)術后再狹窄中的作用及其作用機制,從分子水平為PCI術后再狹窄的預防提供新的研究方向。方法將58只清潔級、體質(zhì)量在300-350g之間的健康雄性Wistar大鼠隨機分為對照組(n=18)、手術組(n=20)及藥物組(n=20)。術前適應性飼養(yǎng)大鼠1周,并于術前12小時開始禁飲食。為預防手術感染,從術前1天至術后3天,給予大鼠腹腔注射青霉素10萬單位/只/天。手術組:經(jīng)腹腔注射10%的水合氯醛(3 ml/kg)將大鼠全身麻醉,從大鼠的左側頸總動脈插入自制的2F球囊導管,并緩慢行至腹主動脈下端,以0.08~0.10 ml生理鹽水充盈球囊,從不同方向反復抽拉導管3次,充分剝脫大鼠主動脈內(nèi)膜,并于術前1天至術后14天或28天給予等劑量生理鹽水灌胃。藥物組:手術方法與手術組相同,并于術前1天至術后14天或28天給予纈沙坦20mg/kg/d(溶于等劑量生理鹽水中)進行灌胃,直至取標本。對照組:除不插入球囊導管進行主動脈內(nèi)皮損傷外,其他均與手術組相同。各組大鼠分別于術后14天、28天在無菌條件下取長約5cm的主動脈血管段,在近主動脈弓端剪取5mm用10%甲醛溶液固定,石蠟包埋,剩余血管段清洗干凈后放入無菌無RNA酶的EP管,-80℃冰箱凍存?zhèn)溆�。石蠟切片行蘇木素-伊紅(HE)染色,在光鏡下觀察血管內(nèi)膜增生的情況,并通過Simple PCI圖形分析系統(tǒng)測量主動脈內(nèi)膜、中膜的厚度,采用實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(real-time RT-PCR)檢測主動脈組織中Apelin的相對表達水平,采用免疫組織化學法檢測主動脈組織中Apelin蛋白的表達水平,并借助Simple PCI圖形分析軟件以平均光密度值表示該蛋白的相對含量。借助SPSS20.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析,計量資料以均數(shù)±標準差((?)±s)表示,多樣本采用單因素方差分析,而組間兩兩比較采用LSD-t檢驗,以P0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。結果(1)術后14天及28天手術組大鼠主動脈內(nèi)膜較對照組顯著增厚(P均0.05),藥物組內(nèi)膜增生程度較手術組明顯減輕(P均0.05);(2)術后14天及28天,手術組大鼠主動脈血管組織中Apelin mRNA和蛋白表達水平較對照組顯著升高(P均0.05),藥物組Apelin mRNA和蛋白表達水平較手術組進一步升高(P均0.05)。結論(1)大鼠主動脈內(nèi)皮球囊損傷后內(nèi)膜增生明顯,同時血管組織中Apelin表達水平明顯升高,提示Apelin可能參與了術后再狹窄的過程;(2)應用纈沙坦干預后,內(nèi)膜增生的程度明顯減輕,同時Apelin表達水平進一步升高,提示纈沙坦抑制術后再狹窄的發(fā)生,其作用機制可能與其上調(diào)血管組織中Apelin的表達有關。
【學位單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R54
【部分圖文】：

第 3 章 實驗結果3.1 動物造模完成情況手術組和藥物組均有 2 只大鼠死于術中或術后感染，術后存活 54 只，各組分別于術后 14 天和 28 天取主動脈組織，各組各時間點均有 9 只大鼠。3.2 組織學檢測術后 14 天及 28 天，手術組內(nèi)膜較對照組顯著增厚（P 均<0.05)。手術組：術后 14 天內(nèi)膜中可見大量的平滑肌細胞增殖，內(nèi)膜和中膜均增厚，但以內(nèi)膜增厚更明顯；術后 28 天，平滑肌細胞的增殖作用減輕，細胞外基質(zhì)明顯增加，內(nèi)膜進一步增厚。與手術組相比，藥物組術后 14 天及 28 天，平滑肌細胞增殖能力減弱，細胞外基質(zhì)分泌減少，內(nèi)膜增生減輕（P 均<0.05)，見圖 3.1 及表 3.1。

圖 3.2 術后 14 及 28 天大鼠主動脈組織 Apelin 免疫組化染色(×400)注：A、B、C 分別為術后 14 天的對照組、手術組、藥物組；D、E、F 分別為術后 28 天的對照組、手術組、藥物組表 3.3 主動脈血管組織中 Apelin 蛋白的表達水平（ X±s，n=9 )注：與對照組比較，a 為 P<0.05 ；與手術組比較，b 為 P<0.05組別 術后 14 天 術后 28 天對照組 0.163±0.011 0.157±0.013手術組 0.317±0.024a0.361±0.018a藥物組 0.583±0.019b0.536±0.021b
【參考文獻】

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本文編號：2849091