目的:環(huán)磷酸鳥苷(cyclic guanosinemonophosphate,cGMP)是一種調(diào)節(jié)心臟功能的胞內(nèi)第二信使,通過細胞膜上的cGMP門控離子通道、cGMP依賴性的磷酸二酯酶(phosphodiesterase,PDE)、蛋白激酶G(cGMP-dependentproteinkinaseG,PKG)和環(huán)磷酸腺苷(cyclicadenosine monophosphate,cAMP)的交叉調(diào)節(jié),進一步參與離子電流的調(diào)控和心肌收縮。磷酸二酯酶3(phosphodiesterase-3,PDE3)的活性接受細胞中cGMP的濃度的控制,而心房肽與其受體結(jié)合引起cGMP產(chǎn)生增多,那么有可能改變細胞中cAMP的濃度,從而調(diào)節(jié)心房的機械性活動。本研究,以快速心房起搏家兔為研究對象,主要以cGMP-PDE3-cAMP信號途徑為切入點,探討PDE3介導的cGMP和cAMP交叉作用,從而進一步闡明房顫時cGMP-PDE3-cAMP信號通路在心房動力改變中的機制提供新的靶點。方法:1.動物模型制備。選用不分雄雌,體重為2.0至2.5kg的新西蘭大耳白兔,分為P0對照組,只插管不給予刺激,P8實驗組,刺激時間為8小時,每組各8只。采用RM6240生理機能實驗系統(tǒng),經(jīng)右頸外靜脈插管電刺激兔心房,同時記錄體表肢體導聯(lián)心電圖。2.形態(tài)學觀察。電刺激結(jié)束后,摘取動物右心房,常規(guī)固定、包埋、制作切片,利用光鏡及透射電鏡觀察心房肌結(jié)構(gòu)變化,觀察并證實快速起搏對心房肌肌漿網(wǎng)、線粒體等超微結(jié)構(gòu)的影響。3.心房鈉尿肽(Atrialnatriureticpeptide,ANP)濃度測定。刺激結(jié)束之后,收集血液,進行離心,之后取上清液。利用放射免疫分析技術(shù)檢測血清中ANP 水平,進一步觀察快速起搏對心房分泌ANP的影響。4.ELISA法檢測cGMP和cAMP的含量。觀察快速起搏心房時心房肌組織中cGMP和cAMP含量。5.Western blot法檢測心房組織中PDE3A的表達,采用外標法測定PDE3活性的變化。結(jié)果:1.利用右側(cè)頸外靜脈插管,建立快速心房起搏家兔模型,容易模擬心房顫動的發(fā)生。2.通過光鏡和透射電鏡觀察到,蘇木素-伊紅染色可見心房肌纖維有分支,并連接成網(wǎng)狀,呈長帶狀,呈明暗交替的橫紋,居于中心的肌纖維,其核為卵圓形。與對照組相比較,起搏8小時組心肌有明顯改變。透射電鏡觀察對照組和刺激8小時組的超微結(jié)構(gòu),可以看到刺激8小時組的線粒體變形、腫脹、山脊排列不規(guī)則、消失,肌漿網(wǎng)擴張,大量空泡形成,肌絲溶解,可見糖原顆粒聚集明顯,核膜已斷裂、凹陷。3.放射免疫分析技術(shù)測定P0、P8家兔血中ANP濃度,結(jié)果P0組為1.6760±0.113μg/L,P8組為2.142±0.156μg/L,與P0組相比,其差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。4.ELISA法檢測結(jié)果表明:cGMP、cAMP的含量會隨著刺激時間的延長而逐漸下降,刺激8小時組的心房組織cGMP、cAMP水平低于對照組,其差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。5.快速心房起搏房顫模型對PDE3表達及活性的影響,結(jié)果可觀察到,起搏 8h后心房組織PDE3A表達較對照組未見明顯改變。與對照組比較,快速起搏后增加心房內(nèi)壓后PDE3活性較對照組明顯降低。結(jié)論:1.快速心房起搏誘導了心肌細胞結(jié)構(gòu)的改變;2.PDE3活性的下降干擾了 cGMP-PDE3-cAMP信號通路環(huán)節(jié),可能成為防治房顫致心房重構(gòu)的藥理學靶點。
【學位單位】：延邊大學
【學位級別】：碩士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R541.7
【部分圖文】：

４．１快速心房起搏家兔模型制備??家兔快速心房起搏模型制備成功，起搏過程當中安靜，能夠順利記錄心電圖。??（圖１）??Ａ圖??ＨＩＳＥ３??Ｂ圖??ｌＬＬ，?＾?二拉卜，一、—ｉ—．?一；?ｉ」’??冬４—４４４４４｝＋４４４＾＋４４４４４４４＾４丄＾卜心率：２購分??０．５ｍｖ??２００ｍｓ??Ｓｈａｍ??５￣￣￣￣ｔ￣￣ｊ￣￣￣￣ｒ￣￣ＩｊＩＪ５￣￣ｊ￣ｔ￣￣｜￣ｔ￣ｌ￣￣ｆ￣￣ｒ￣￣｜￣ｒ￣￣ｉ?？—￣￣Ｊ￣￣￣￣￣￣Ｉ￣￣５￣＾［??Ｉ；．：?ｊ；｜?ｉ＂?ｉ?＇■；，?ｉ?ｊ?Ｉ?ｉ?Ｉ?１?１?ｊ．；ｉ?１??Ｖ?＾?＾＾＾＾＾＾?ｌ）?＾＼３＾?＾＾?＾?Ｖ?Ｍ?＾ｌ?＾Ｍ；－＇?１?＾＾?＾?心率：６００次／分??？?＇?＇?：｜?ｒ?Ｉ?；ｉ??＇?？?．ｊ?．?ｉ?；?ｉ?ｉ?４?１?ｉ?：：????ｉ．．．：．Ｌ．．�。�?．．Ｊ??－－Ｌ?Ｊｊ?ｔ．?．?ＬＨｉｌＵ－ｉｌ－－－－??ＶＬ??ｌｌｋｉ？ｌｆｅｋ＾ｉ＾Ｓｌｉｉ）ｉｉｉ?ｉｉｉｉｉｉｉｉｉｉ?ｉｉｉｉｉｉ?ｉｔｉｉｉｉｉｉｉ?ｔｉｉｉｉｔ?１１??ＲＡＰ??圖１快速心房起搏家兔模型的建立??Ａ圖：刺激電極和解剖學鑒定Ｂ圖：體外肢體導聯(lián)心電圖??１７??

小時組的超微結(jié)構(gòu)，可以看到刺激８小時組的線粒體變形、腫脹、山脊排列不規(guī)??貝ＩＪ、消失，肌漿網(wǎng)擴張、量空泡形成、肌原纖維溶解，可見糖原顆粒堆積明顯，??核膜破裂破碎。（圖３、圖４）??＊?．??？?：??■■■■?？■■■??１８??

臨床研究顯示，房顫患者血中ＡＮＰ水平增高，為了證明這一改變，我們采??用放射免疫分析技術(shù)測定ＰＯ、Ｐ８家兔血中ＡＮＰ濃度，結(jié)果ＰＯ組１．６７６０±０．１１３?ｐｇ／Ｌ，??Ｐ８組為２．１４２±０．１５６ｎｇ／Ｌ，與Ｐ０組對比，其差異有統(tǒng)計學意義（圖５，Ｐ＜０．０１）。??３．０?－Ｉ??２．５?－??廣?，?Ｍ??Ｉ?－??Ｉ?１．０．?＿囊??０．０?＾???Ｐ０?Ｐ８??圖５快速心房起搏對家兔血中ＡＮＰ濃度的影響（ｎ＝８）??注：＊與對照組相比，Ｐ＜０．０５??１９??
【參考文獻】

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本文編號：2843603