發(fā)布時間：2020-07-24 04:37

【摘要】：目的肺動脈高壓是慢性肺部疾病常見并發(fā)癥。肺動脈平滑肌細(xì)胞異常增殖引起的肺血管重塑在肺動脈高壓的形成機(jī)制中起著關(guān)鍵作用。雖然治療潛在的肺部疾病可以降低輕度的肺動脈壓力升高,但終末期肺病的肺動脈高壓仍難以逆轉(zhuǎn)。目前特發(fā)性肺動脈高壓和慢性肺病所致肺動脈高壓的治療藥物在臨床試驗中并未取得理想的效果。有研究表明中藥丹參的有效成分-丹參酮ⅡA用于治療肺動脈高壓可以降低平均肺動脈壓力,緩解臨床癥狀、增加運(yùn)動耐量,但具體機(jī)制不明。本研究通過觀察丹參酮ⅡA磺酸鈉(sodium tanshinoneⅡA sulfonate,STS)干預(yù)對低氧狀態(tài)下大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)增殖的影響并進(jìn)一步探討其分子機(jī)制。方法(1)大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞株傳代后隨機(jī)分為常氧組、常氧+STS組(5ng/ml、10ng/ml、20 ng/ml)、低氧組、低氧+STS組(5 ng/ml、10ng/ml、20 ng/ml)。用CCK-8分別測定各組的吸光度值代表肺動脈平滑肌細(xì)胞的增殖率。(2)同上述培養(yǎng)方法,將肺動脈平滑肌細(xì)胞隨機(jī)分為常氧組、低氧組和低氧+STS組(10ng/ml),通過熒光定量PCR法分別測定各組細(xì)胞mTOR、eIF2α、c-myc mRNA的相對表達(dá)量。(3)培養(yǎng)方法與上述一致,常氧和低氧下將肺動脈平滑肌細(xì)胞隨機(jī)分組培養(yǎng),設(shè)常氧組、低氧組、低氧+STS組(10 ng/ml)、低氧+雷帕霉素組(20 nmol/L),采用蛋白質(zhì)印跡法檢測各組細(xì)胞mTOR、p-mTOR、eIF2α、p-eIF2α、c-myc蛋白表達(dá)量。結(jié)果(1)與常氧組比較,低氧組細(xì)胞的增殖率明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P㩳0.05);與低氧組比較,STS干預(yù)后的低氧組細(xì)胞增殖率明顯降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P㩳0.05)。然而,與常氧組比較,常氧+STS組細(xì)胞增殖率無明顯差別,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2)通過PCR檢測分析顯示:與常氧組比較,低氧組細(xì)胞mTOR、eIF2α和c-myc mRNA的相對表達(dá)量明顯升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均㩳0.05);與低氧組比較,低氧+STS組的三種mRNA相對表達(dá)量下降,其差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均㩳0.05)。(3)Western blotting法檢測各組細(xì)胞蛋白表達(dá):與常氧組比較,低氧組細(xì)胞mTOR、p-mTOR、eIF2α、p-e IF2α、c-myc蛋白表達(dá)均顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均㩳0.05);低氧+STS組和低氧+雷帕霉素組mTOR、mTOR、t-eIF2α、p-eIF2α、c-myc蛋白表達(dá)較低氧組均升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均㩳0.05);而低氧+雷帕霉素組與低氧+STS組的蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論(1)低氧可以上調(diào)mTOR、eIF2a、c-myc蛋白而促進(jìn)大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖,從而誘發(fā)肺動脈高壓。(2)丹參酮ⅡA磺酸鈉可以經(jīng)mTOR信號通路,減少eIF2a及c-myc蛋白表達(dá)水平,抑制低氧誘導(dǎo)的大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖,對肺動脈高壓有潛在的治療作用。
【學(xué)位授予單位】：江蘇大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R544.1
【圖文】：

3.1 肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖情況的比較在未給予 STS 干預(yù)處理的情況下，與常氧組比較，低氧條件下平滑肌細(xì)的增殖水平呈現(xiàn)出顯著升高的趨勢（P㩳0.05），說明低氧可促進(jìn)大鼠肺動脈肌細(xì)胞增殖。而給予 STS 干預(yù)處理常氧和低氧下培養(yǎng)的平滑肌細(xì)胞后的增殖況：與低氧組比較，低氧下的平滑肌細(xì)胞經(jīng) STS（5 ng/ml、10 ng/ml、20 n干預(yù)處理 60 小時后的增殖水平呈現(xiàn)下降趨勢（P㩳0.05），說明 STS 對低氧平滑肌細(xì)胞增殖有抑制作用，而且隨著 STS 濃度增加，抑制增殖的作用逐漸強(qiáng)，呈濃度依賴性。與常氧組比較，常氧下的平滑肌細(xì)胞經(jīng) STS（5 ng/ml、10 n干預(yù) 60 小時后的增殖水平（P㧐0.05）無明顯下降，但 STS 濃度達(dá)到 20 ng細(xì)胞增殖水平呈現(xiàn)明顯減少趨勢，考慮此濃度的 STS 對細(xì)胞有毒性作用，因接下來均選擇藥物濃度為 10 ng/ml 的 STS 用于實驗。（見圖 3.1）

丹參酮ⅡA 磺酸鈉對低氧誘導(dǎo)的大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖抑制作用及其機(jī)制研究胞加入 STS（10ng/mL）。采用實時熒光定量 PCR 檢測 mTOR、eIF2α、c-myc mRNA的相對表達(dá)量，其結(jié)果顯示：與常氧組比較，mTOR、 eIF2α 和 c-myc mRNA 在低氧培養(yǎng)的肺動脈平滑肌細(xì)胞的相對表達(dá)量明顯升高（P㩳0.05），表明低氧能夠促進(jìn)平滑肌細(xì)胞高表達(dá)三種基因的 mRNA；而與低氧組比較，STS 處理低氧培養(yǎng)的平滑肌細(xì)胞后 mTOR、eIF2α、c-myc mRNA 相對表達(dá)量呈現(xiàn)下降（P㩳0.05），表明 STS 能抑制低氧下平滑肌細(xì)胞的 mTOR、eIF2α、c-myc mRNA 高表達(dá)。（見圖 3.2）

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 宿夢琦;楊紅;饒懸;周長林;竇潔;;低氧誘導(dǎo)蛋白與腫瘤發(fā)生發(fā)展的研究進(jìn)展[J];藥物生物技術(shù);2018年04期

2 王瓊;盧慕峻;;低氧誘導(dǎo)成體干細(xì)胞血管化[J];組織工程與重建外科雜志;2015年04期

3 殷愛紅;武文琦;何麗明;鄭少鵬;;低氧誘導(dǎo)人VEGF基因表達(dá)載體的構(gòu)建及其蛋白表達(dá)檢測[J];山東醫(yī)藥;2011年52期

4 劉江;吳巍;何衛(wèi)美;朱偉華;劉春燕;董權(quán);鄒偉華;李偉平;;低氧誘導(dǎo)的非酒精性脂肪性肝炎動物模型的構(gòu)建[J];浙江醫(yī)學(xué);2014年07期

5 李兵;趙黎明;王海青;王桂芳;修清玉;;低壓低氧誘導(dǎo)大鼠阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征后咽部肌肉結(jié)構(gòu)和功能的改變[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2006年04期

6 楊磊;鄭金旭;史小東;錢海;孫金玲;;丹參酮ⅡA磺酸鈉抑制低氧誘導(dǎo)的大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖及其機(jī)制[J];江蘇大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2018年03期

7 龐靜雯;吳亞霖;徐婷;莊秀妹;;低氧誘導(dǎo)人牙周膜成纖維細(xì)胞凋亡的研究[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2017年09期

8 殷愛紅;武文琦;崔世軍;滕旭;鄭少鵬;;低氧誘導(dǎo)VEGF基因表達(dá)載體治療家兔肢體缺血性疾病的實驗研究[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2012年03期

9 林紅,蔡英年,鄧希賢,李世強(qiáng),梁兵,周曉梅,蔡起薔,楊燕芬;低氧誘導(dǎo)肺血管平滑肌細(xì)胞誘生型一氧化氮合酶基因表達(dá)[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;1997年03期

10 馬子敏,楊曦明,洪欣,孫興斌,謝印芝;低氧誘導(dǎo)法培養(yǎng)大鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞[J];航天醫(yī)學(xué)與醫(yī)學(xué)工程;2000年05期

相關(guān)會議論文 前10條

1 師永紅;王玉湘;宮麗華;吳巖;石艷春;方偉崗;;bFGF和低氧誘導(dǎo)VEGF分泌的作用機(jī)制及其信號通路[A];第四屆中國腫瘤學(xué)術(shù)大會暨第五屆海峽兩岸腫瘤學(xué)術(shù)會議教育集[C];2006年

2 康裕建;;銅離子調(diào)節(jié)低氧誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子活性的機(jī)制及應(yīng)用[A];第八屆全國醫(yī)學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)第五屆全國臨床應(yīng)用生物化學(xué)與分子生物學(xué)2013華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)聯(lián)合學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2013年

3 王嬙;顧鐳;王艷艷;沈友軒;張繆佳;;Stats激活對低氧誘導(dǎo)肺動脈平滑肌細(xì)胞凋亡的影響[A];第17次全國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

4 劉婷;李運(yùn)成;賀斌峰;王關(guān)嵩;;S100A4/Mts1在低氧誘導(dǎo)肺動脈平滑肌中的作用機(jī)制[A];中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)年會——2011（第十二次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會議）論文匯編[C];2011年

5 尚俊依;李爾然;王秋月;康健;;低氧誘導(dǎo)AQP1表達(dá)的分子機(jī)制[A];中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)年會——2011（第十二次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會議）論文匯編[C];2011年

6 聶欣;施熠煒;許建英;杜永成;;KLF4在低氧誘導(dǎo)肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖及表型轉(zhuǎn)化中的作用研究[A];中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)年會——2013第十四次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

7 杜繼曾;陳學(xué)群;;CRFR1受體調(diào)節(jié)低氧誘導(dǎo)的腦-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡(luò)反應(yīng)[A];2008年神經(jīng)內(nèi)分泌暨神經(jīng)免疫內(nèi)分泌學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2008年

8 梁燕;繆冉;王望;王穎;黃驍舾;王軍;王辰;;抑制Notch3通過降低庫容性鈣內(nèi)流抑制低氧誘導(dǎo)的人肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖[A];中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)年會——2013第十四次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2013年

9 陳銳;劉春風(fēng);;慢性間歇低氧誘導(dǎo)小鼠學(xué)習(xí)記憶障礙的機(jī)制探討[A];中華醫(yī)學(xué)會呼吸病學(xué)年會——2011（第十二次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會議）論文匯編[C];2011年

10 顧鐳;王嬙;梅煥平;沈友軒;張繆佳;;自體吞噬抑制劑3-MA對低氧誘導(dǎo)肺動脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響[A];第17次全國風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2012年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 汪敏 章米力;低氧誘導(dǎo)白血病細(xì)胞分化[N];健康報;2005年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 蔣蕊;新奇型蛋白激酶C在低氧誘導(dǎo)的肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖中的作用和機(jī)制研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2018年

2 曾超;經(jīng)典型蛋白激酶C亞型對低氧誘導(dǎo)的小鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制探討[D];山西醫(yī)科大學(xué);2018年

3 張曉萍;ABCA1對低氧誘導(dǎo)的肺動脈高壓的影響及其機(jī)制研究[D];鄭州大學(xué);2018年

4 范亮;低氧誘導(dǎo)的肺癌局部腎素—血管緊張素系統(tǒng)失衡及其對肺癌侵襲影響研究[D];上海交通大學(xué);2012年

5 郭黎;低氧誘導(dǎo)通路相關(guān)基因的單核苷酸多態(tài)性和急性高山病的關(guān)聯(lián)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2015年

6 張衛(wèi)芳;LOX-1在低氧誘導(dǎo)肺動脈高壓肺血管重構(gòu)中的作用及機(jī)制[D];中南大學(xué);2013年

7 李強(qiáng);低氧誘導(dǎo)成骨細(xì)胞增殖分化兩種機(jī)制的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2016年

8 �，�;MiR-375在低氧誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞自噬中的作用和機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2012年

9 呂順艷;血管鈉肽對低氧誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞、心成纖維細(xì)胞以及血管平滑肌細(xì)胞生長的抑制調(diào)節(jié)[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2002年

10 孫慶佳;周期性低氧誘導(dǎo)喉癌細(xì)胞化療抵抗的作用機(jī)制[D];吉林大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 楊磊;丹參酮ⅡA磺酸鈉抑制低氧誘導(dǎo)的大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖的體外研究[D];江蘇大學(xué);2018年

2 鄧捚;吳茱萸次堿對低氧誘導(dǎo)的人肺動脈平滑肌細(xì)胞的作用及機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

3 楊姍;自噬在低氧誘導(dǎo)腎小管上皮細(xì)胞凋亡中的作用[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2018年

4 魏伊藍(lán);胞外熱休克蛋白90α在低氧誘導(dǎo)的非小細(xì)胞肺癌侵襲轉(zhuǎn)移中的作用與機(jī)制研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

5 孟威;低氧誘導(dǎo)雪旺細(xì)胞AQP1表達(dá)機(jī)制的相關(guān)實驗研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2017年

6 李彩霞;青心酮對低氧誘導(dǎo)的人肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖的影響[D];南華大學(xué);2013年

7 于文燕;蛋白激酶Cα在低氧誘導(dǎo)的大鼠肺動脈平滑肌細(xì)胞增殖中的作用機(jī)制[D];山西醫(yī)科大學(xué);2013年

8 王凡;低氧誘導(dǎo)的miR-147a通過靶向HIF-3α影響細(xì)胞增殖[D];清華大學(xué);2016年

9 李東峰;MicroRNA-24抑制低氧誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡的初步研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2009年

10 董小銣;HUMMR在低氧誘導(dǎo)神經(jīng)元線粒體損傷中的作用研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2015年

本文編號：2768334